高效液相色谱法测定山楂叶中槲皮素的含量

                   作者：权迎春 关丽萍 郑光浩

【关键词】  高效液相色谱法

    摘要：目的建立山楂叶中高效液相色谱(HPLC)法的含量测定方法。方法采用HPLC对槲皮素进行定量测定；采用YMCpack ODSA(4.6 mm×250 mm,5 μm)，色谱柱，检测波长为370 nm。结果色谱条件为流动相 甲醇0.2%磷酸溶液(50∶50)；柱温25℃；流速0.8 ml・min1，此法线性范围0.08～0.32 μg，r=0.999 2，方法的精密度RSD为1.04%(n=5)。平均回收率为96.75%，RSD=1.67%(n=5)。结论此方法操作简便、准确性好，可以作为山楂叶中槲皮素含量测定方法。

    关键词：山楂叶；  高效液相色谱法；  槲皮素；  含量测定

      Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of quercetin in hawthorn leaf.MethodsThe content of quercetin was detemined by HPLC.YMC ODSA(4.6 mm×250 mm,5 μm)column was used.The detection wavelegth was set at 370 nm.ResultsThe mobile phase consisted of methanol0.2%phosphatic acid(50∶50)with flow rate 0.8 ml・min1and column temperature at 25℃.The method was liner within the range of 0.08～0.32 μg(r=0.999 2).The method RSD was 1.04%(n=5).The average recovery of assay was 96.75% and RSD=1.67%(n=5).ConclusionThe method appeared to be simple,highly accurate.It can be used for the appeared determination of quercetin in hawthorn leaf.

    Key words:Hawthorn leaf;  HPLC;  Quercetin;  Determination

    山楂叶为蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifida Bge.Var.major N.E. Br.或山楂Crataegus pinnatifida Bge的干燥的叶，秋季果实成熟后采收。多产于我国北方，是一种常用天然药用植物，其野生资源非常丰富。近几年随着提取工艺、检测手段的提高，对于山楂叶的研究有了很大进展。研究表明，已经从山楂叶中分离出山楂素、槲皮素、山萘酚、芦丁、胡萝卜苷及二十九烷醇等成分［1，2］。其药理作用主要有对抗氧自由基的清除作用、降血压、降血脂功能［3，4］等。槲皮素为山楂叶中一种黄酮类化合物，研究表明，槲皮素具有抗炎、抗自由基、抗氧化的药理活性［5，6］。本实验采用HPLC色谱法测定了山楂叶中槲皮素的含量，此方法准确、灵敏度高、重现性好。

    1  仪器、试剂和药品

    SCL10Avp型高效液相色谱仪(日本岛津)；SPD10Avp型紫外可见检测器(日本岛津)；RE52C型旋转蒸发仪(上海青浦沪西仪器厂)；SHSB95型循环水式真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；TG328B型分析天平(上海精密仪器有限公司)；MP200型天平(上海良平仪器仪表公司)。甲醇(色谱纯)，槲皮素(对照品，药品生物制品检定所)。样品采自吉林省延吉市市郊，由延边大学药学院刘永镇教授鉴定为真品。

    2  方法与结果

    2.1  色谱条件色谱柱为YMCpack ODSA(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱；流动相为甲醇0.2%磷酸溶液(50∶50)；柱温：25℃；流速：0.8 ml・min1。

    2.2  测定波长的选择取槲皮素对照品配制成一定浓度的甲醇溶液，在200～500 nm波长范围内进行紫外光谱扫描，确定370 nm做为测定波长。

    2.3  标准曲线绘制

    2.3.1  标准溶液的配制精密称取槲皮素对照品8.9 mg，置于50 ml量瓶中，加入甲醇溶解，定容于50 ml，然后精密吸取1 ml置于10 ml容量瓶中定容，备用。

    2.3.2  线性范围取上述槲皮素对照品溶液，分别进样5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，17.5 μl，按色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准吸收曲线，得槲皮素(C)与峰面积(A)的关系，C=599 370－1.628 245A，相关系数r=0.999 2。结果表明，槲皮素溶液浓度在0.08～0.32 μg内，槲皮素峰面积(A)与浓度(C)之间呈良好的线性关系。HPLC色谱图见图1。

    图1  HPLC色谱图

    2.4  精密度实验精密吸取对照品供试液，按“2.1”项下条件，连续进样5次，10 μl/次，测定峰面积积分值RSD值，结果RSD=1.04%，说明仪器和色谱条件均具有良好的精密度。

    2.5  重现性实验精密称取药品粉末0.5 g共5份，按“2.8”项下样品溶液的制备操作，按“2.1”项下条件连续进样5次，每次20 μl，测定峰面积计算得RSD=1.35%，结果显示，该方法具有较好的重现性。

    2.6  稳定性实验在室温条件下，将样品按测定方法处理后，分别在0，0.5，1.0，1.5，2.0 h每次进样20 μl，测得峰面积计算RSD=0.84%（n=5）。结果表明，该溶液含量基本保持不变。

    2.7  回收率实验精密称取样品0.5 g共10份，其中5份按2.8项下测定样品本底含量，5份各加入槲皮素对照品溶液适量，溶解。按2.8项下采用高效液相色谱法测定槲皮素含量，计算回收率为96.75%，RSD为1.67%(n=5)。

    2.8  山楂叶提取物中槲皮素含量的测定称取干燥并切成细段的山楂叶50 g，用8倍量75%乙醇浸泡过夜，80℃水浴里回流3 h，提取两次，合并滤液，用旋转蒸发器减压浓缩，获山楂叶乙醇提取物粗粉，精密称取提取物100 mg，加入少量甲醇溶解，移入50 ml量瓶中，定容，摇匀，用微孔滤膜过滤，作为供试液，精密移取供试液20 μl，注入高效液相色谱仪，在370 nm处测定峰面积，根据线性回归方程，计算含量见表1。

    表1  山楂叶中槲皮素含量测定的结果序号  （略）

    3  讨论

    本实验利用高效液相法测定山楂叶中槲皮素的含量尚属首次，该方法简便、准确，重现性好，为山楂叶药物的开发提供了质量控制标准。

    ：

［1］  张培成,徐绥绪.山楂叶化学成分研究［J］.药学学报，2001:36(10):754.
［2］  斯建勇,陈迪华.云南山楂叶化学成分的研究［J］.中药杂志，1998,23(7):422.
［3］  黄沛力,曾绍辉.银杏叶、山楂叶对抗氧自由基的清除作用［J］.中国中药杂志,1996,21(4):245.
［4］  黄  飞.山楂叶多糖的功能活性测定研究［J］.广西轻,2001，(2):47.
［5］  Zhang XW,Zhang XB,Quan JS,et al.Inhibitory effect of sorbifolia on DENinduced precancerous hepatic foci and its antioxidative activies in rats［J］.肿瘤防治杂志,2003,10(11):1137.