长叶胡颓子对大鼠实验性结肠炎作用的研究
【关键词】 长叶胡颓子；,,,抗氧作用；,,,结肠炎
摘要：目的研究长叶胡颓子果实提取物对大鼠结肠炎损伤的保护作用。方法建立大鼠结肠炎模型，灌肠用药2周后，评价大鼠结肠黏膜损伤指数（CMDI），检测结肠髓过氧化物酶（MPO）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPX）活性及丙二醛（MDA）的含量。结果长叶胡颓子果实提取物（300，500，1 000 mg/kg）灌胃用药均能不同程度降低模型大鼠结肠损伤指数和MPO活性、减少MDA含量，提高SOD，GSHPX活性，且与用药剂量呈一定量效关系。结论长叶胡颓子通过抗脂质过氧化，对大鼠结肠炎结肠损伤进行修复，减轻结肠损伤，抑制结肠炎大鼠炎症反应。
关键词：长叶胡颓子； 抗氧作用； 结肠炎
Study on the Effects of Elaeagnus bockii Diels on the Experimental Colonitis in Rats
Abstract:ObjectiveTo study the protect effect of Elaeagnus bocki Diels water extract on colonitis in rats.MethodsRat colonitis model was established.Elaeagnus bocki Diels was used by clyster once a day.After two weeks,the colonmucoss damage index CMDI was evaluated.The activity of MPO,GSHPX,SOD and the levels of MDA in the colon were measured.ResultsElaeagnus bockii Diels water extract (300,500,1 000 mg/kg) decreased the activity of CMDI,MPO and the levels of MDA,increased the activity of SOD,GSHPX in model rats.ConclusionTreatment with Elaeagnus bockii Diels can alleviate the colon injury in colonitis rats,by eliminating oxygen free radical and repairing wound.
Key words:Elaeagnus bockii Diels; Antioxidation; Colonitis
胡颓子属在全球约有80余种［1］，长叶胡颓子Elaeagnus bockii Diels是其中一种，属珍贵的药食两用植物，根、叶、果皆可入药［2］。长叶胡颓子可健胃，肠胃虚弱，消化不良等症状，其果实味酸、涩，含鞣质［3］，有涩肠止泻作用［4］，民间习用。为探讨长叶胡颓子对炎症性肠炎是否有抗损伤保护作用，笔者通过建立大鼠肠炎模型，采用长叶胡颓子果实提取物灌胃给药，进行了相关实验研究。现将研究结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 长叶胡颓子果实水提取物野生长叶胡颓子果实于2005-04采自湖北恩施自治州巴东野三关。长叶胡颓子果实水提取物：以下简称提取物（生药含量1 mg/ml），挑选上好果实水煎煮3次，过滤后浓缩成1 g/ml的浓度即得。
1.1.2 试剂和仪器2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）为美国Sigma公司产品，柳氮磺吡啶（SASP）原药由上海三维制药有限公司提供（国药准字H31020450），MPO、SOD、MDA、GSHPX试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。 AEPROSET 09D0501全自动生化分析仪（美国），TL16G型高速冷冻离心机（上海实验仪器厂生产）。
1.1.3 动物健康Wistar大鼠，雌雄兼用，体重250~270 g，由湖北省动物实验中心提供。
1.2 方法
1.2.1 动物模型的建立及处理［5］：大鼠禁食24 h后（饮水照常），将溶于体积分数为50%乙醇的TNBS按100 mg/kg的体重、体积0.25 ml/只，用导管（直径4 mm）经肛门插入结肠内约8 cm灌肠1次，建立大鼠结肠炎模型。实验设正常组、模型组、阳性药物对照组（灌服SASP 200 mg・kg-1）、胡颓子给药组（灌服胡颓子提取液300，500，1 000 mg・kg-1），从制备模型7 d后开始灌胃给药，1次/d，共14 d。正常组与模型组均给予等量生理盐水灌胃。
1.2.2 指标检测及方法实验完成后处死动物，参考文献［6］方法及标准评价CMDI，评分标准为：0=无损伤；1=轻度充血、水肿，表面光滑，无糜烂或溃疡；2=充血水肿，黏膜粗糙呈颗粒状，有糜烂或肠粘连；3=高度充血水肿，黏膜表面有坏死及溃疡形成，溃疡最大纵径＜1 cm，肠壁增厚或表面有坏死及炎症；4=在3分基础上溃疡最大纵径＞1 cm，或全肠壁坏死。结肠标本常规石蜡包埋、切片，HE染色，光镜观察。另取新鲜结肠组织，用预冷的生理盐水冲洗除去血液，滤纸吸干称重，加9倍生理盐水，在低温（冰水）中用玻璃研磨器研磨制成10%的组织匀浆，高速离心取上清液低温（3℃）保存待测。MPO，SOD，GSHPX检测操作按试剂盒说明书进行。
1.2.3 数据分析实验数据采用SPSS10.0软件进行t检验统计处理。
2 结果
2.1 结肠标本病理组织学观察模型组大鼠结肠黏膜充血水肿，大量炎性细胞浸润，肠壁增厚，黏膜表面有明显坏死及溃疡形成，腺体中杯状细胞减少。而不同剂量的长叶胡颓子用药组以上病理组织表现明显缓解。
2.2 对结肠炎大鼠结肠损伤及炎症反应的影响CMDI，MPO活性分别是反映结肠损伤与炎症程度的主要指标，两者在模型组大鼠升高，而长叶胡颓子（300，500，1 000 mg・kg-1）与SASP（200 mg・kg-1）灌胃用药均不同程度降低了CMDI及MPO活性（P＜0.05，P＜0.01），且长叶胡颓子用药呈现一定量效关系。结果见表1。
2.3 对结肠炎大鼠氧自由基的影响与模型组比较，长叶胡颓子提取物（300，500，1 000 mg・kg-1）与SASP（200 mg・kg-1）灌胃用药均降低结肠组织中MDA含量，升高SOD，GSHPX活性，且长叶胡颓子中、大剂量作用显著（P＜0.01）。结果见表2。
表1 长叶胡颓子对结肠炎大鼠结肠损伤及炎症反应的影响(略)
与对照组比较，a：P＜0.01；与模型组比较，b：P＜0.01；c：P＜0.05，n=10
表2 长叶胡颓子对结肠炎大鼠氧自由基的影响(略)
与对照组比较，a：P＜0.01；与模型组比较，b：P＜0.01；c：P＜0.05，n=10
3 讨论
TNBS与乙醇诱发大鼠结肠炎的主要机理为乙醇破坏结肠粘膜屏障，TNBS渗入结肠与大分子物质结合，形成全抗原引起肠壁一系列免疫应答与炎症反应，其发病机理及病理表现与人类炎症肠炎非常相似。免疫异常、氧自由基作用在炎症性肠病的发病机理中占有重要地位。SOD能有效地清除氧自由基从而抑制结肠组织中的脂质氧化反应，并能保护细胞。目前许多实验通过检测SOD活性及MDA浓度的变化来反应其脂过氧化反应。本实验采用TNBS与乙醇诱发大鼠结肠炎模型后，发现大鼠结肠组织中SOD活性显著降低，MDA浓度明显升高，证明了氧自由基在炎症状性肠病的发病机理中起重要作用。在本研究中通过病理组织学观察到，长叶胡颓子组病理组织损伤程度明显缓解，且呈一定剂量效应，显示采用长叶胡颓子提取物灌胃用药可明显减轻模型组大鼠结肠损伤，缓解炎症反应，表现出抗炎、抗损伤的保护作用；实验中，长叶胡颓子提取物灌胃用药能降低结肠炎模型组大鼠代谢产生的脂质过氧化物MDA含量，升高重要抗氧化酶SOD，GSHPX活性，表现出抗氧化特性，从而抑制结肠组织中的脂质过氧化反应，保护细胞膜，缓解氧自由基的损伤致炎作用。以上结果表明，长叶胡颓子果实提取物对大鼠结肠炎损伤具有保护作用。
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［1］ 林来官.福建植物志,4卷［M］.福州:福建技术出版社,1989:45.
［2］ 胡丰林.胡颓子属植物利用价值的初步分析［J］.生物学杂志,1996,(4):30.
［3］ 张贵君.中药材商品通鉴［M］.北京:中国中医药出版社，2001：1611.
［4］ 黄泰康，丁志遵，赵守训，等.现代本草纲目［M］.北京:中国医药科技出版社，2001：1843.
［5］ 梅 俏,于皆平,许建明,等.褪黑素对结肠炎大鼠免疫功能的影响［J］.世界华人消化杂志,2002,10(2):193.
［6］ Millar AD,Rampton DS，Chander CL,et al.Evaluating the antioxidantant potential of new treatments for inflammatory bowel disease using a rat model of colitis［J］.Gut,1996:39(1):93.
