鼻敏水治疗变应性鼻炎大鼠的实验研究
作者：黄卓燕，张勉，韦子章，方燕飞
【关键词】 变应性鼻炎；,,鼻敏水滴鼻剂
摘要：目的探讨鼻敏水滴鼻剂变应性鼻炎药效。方法以卵清白蛋白致敏大鼠制做I型变态反应动物模型，随机分为3组:模型对照组、鼻敏水组、药物对照组，并设正常对照组，分别观察各组大鼠行为学表现及测定其鼻黏膜组胺含量、鼻分泌物和血清嗜酸性粒细胞、血清总IgE水平。结果行为学积分，给药后鼻敏水组、药物对照组行为学积分明显低于模型对照组（P＜0.01），鼻敏水组积分低于药物对照组（P＜0.01）；鼻敏水组和药物对照组鼻黏膜含量、鼻分泌物嗜酸性粒细胞明显低于模型对照组（P＜0.01），鼻敏水组和药物对照组比较有显著性差异（P＜0.01）；鼻敏水组和药物对照组血清嗜酸性粒细胞记数、总IgE水平明显低于模型对照组（P＜0.01），鼻敏水组和药物对照组比较无统计学意义（P＞0.05）。结论 鼻敏水滴鼻剂能降低实验性大鼠鼻黏膜组胺含量，抑制或降低其血清总IgE水平及嗜酸性粒细胞记数，提示鼻敏水滴鼻剂对变应性鼻炎具有治疗作用。
关键词：变应性鼻炎； 鼻敏水滴鼻剂
Experimental Research on the Treatment with BiMinShui on Allergic Rhinitis of Rats
Abstract：ObjectiveTo investigate the medical effect of BiMinShui nose drops on the treatment of allergic rhinitis. MethodsTo make typeⅠallergological rat models allergized by ovalbumin, and divide the models into three groups at random:the group of control, the group of BiMinShui and the group of drug control.Besides, to establish a group of nonmedical models. To observe the ethological performance of rats and examine the contents of histamine in nasal nucous coat, nasal secretions; oxyphilic granular leukocytes and total IgE values in blood serum.ResultsThe posttreatment ethological integration in the group of BiMinShui and the group of drug control was significantly lower than that in the group of control(P＜0.01).Integration in the group of BiMinShui was lower than that in the group of drug control(P＜0.01).The contents of histamine in nasal mucous coat, nasal secretions and oxyphilic granular leukocytes in the group BiMinShui were obviously lower than those in the control group(P＜0.01).The distinction between the group of BiMinShui and the group of drug control was significant(P＜0.01).The counting of oxyphilic granular leukocytes and total IgE values in the group of BiMinShui and the group of drug control were evidently lower than those in the group of control(P＜0.01),but the distinction between the group of BiMinShui and the group of drug control was of no statistical significance(P＞0.05).ConclusionBiminshui nose drops can reduce the contents of histamine in nasal nucous coat of experimental rats, constrict or decline the total IgE values in blood serum and the counting of oxyphilic granular leukocytes. BiMinShui nose drops is effective in treating allergic rhinitis.
Key words：Allergic Rhinitis; BiMinShui Nose Drops
变应性鼻炎 (AR)是IgE介导的I型变态反应性疾病，该病发病率有逐年上升趋势。据国外统计，发病率为10％～40％［1］，在我国患病率为37.74％［2］，每年约有2 000万人患病［3］，Bousquet指出，必须将PAR看作严重的全球性健康问题。［4］通过动物模型观察鼻黏膜的改变，发现鼻黏膜有明显的变应性炎症反应，提示对变应性鼻炎治疗中鼻腔局部用药的重要性。本研究通过观察鼻敏水滴鼻剂对实验性变应性鼻炎大鼠鼻部症状、鼻分泌物和血清中嗜酸性细胞、鼻黏膜组织形态、鼻黏膜组胺含量、血清总IgE的影响，以探讨其对PAR的防治作用，为临床应用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 清洁级Wistar大鼠40只，雌雄各半，体重(160±50) g。由广西中医学院实验动物中心提供。
1.1.2 药品 鼻敏水滴鼻剂药物组成：辛夷花、白芷、百部、牛蒡子、蒺藜、鱼腥草、地肤子、鹅不食草、荆芥、薄荷等。由广西中医学院第一附属制剂室提供，10 ml/支，批准文号：桂卫药制字（1998）005025。0.5%麻黄素地塞米松液（1%麻黄素滴鼻液5 ml＋地塞米松注射液2.5 mg＋生理盐水5 ml，由广西中医学院第一附属医院制剂室配制提供）。
1.2 方法
1.2.1 动物造模、分组及给药 清洁级Wistar大鼠40只，完全随机分为4组，除正常对照组（10只）外，其余各组按林健、曹平等［5］报道的方法制备变应性鼻炎动物模型。①每只大鼠分别予腹腔注射卵清蛋白混悬液(卵清蛋白0.3 mg与氢氧化铝30 mg溶于1 ml生理盐水配成)，同时给正常对照组每只注射生理盐水1 ml，隔日注射1次，共注射7次。②腹腔注射完成以后第2天,配制0.5%的卵清蛋白生理盐水溶浓，经雾化后导入一只侧面开洞的大鼠盒中，将需要造模的大鼠每批1笼（10只）放入大鼠盒中，上面用洁净的玻璃盖好。开启雾化器，调节汽雾流量，每批10 min左右，保证每批雾化量要达到10 ml，平均每只豚鼠吸入2 ml左右，正常对照组用纯生理盐水同样操作。每日吸入一次，共连续5次。③隔3 d后，取2%卵清蛋白生理盐水液，通过滴管对造模组大鼠逐只进行滴鼻，平均每只大鼠每侧鼻孔滴入0 .1 ml; 正常对照组组用生理盐水同样操作。1次/d，共滴4次。每次鼻腔致敏后,立即观察30 min。记录大鼠鼻分泌量、喷嚏及搔鼻次数,采用叠加量化记分法记分。2004年兰州会议制定的变应性鼻炎的诊治原则，拟鼻痒：无抓鼻为0分,轻度抓鼻为1分,频繁抓鼻为2分,抓鼻不止为3分；喷嚏：无喷嚏0分，打喷嚏1～3个为1分, 4～10个为2分,大于11个为3分；鼻涕：无鼻涕为0分，流至前鼻孔为1分,超出前鼻孔为2分,涕流满面为3分。总分超过6分者示造模成功。模型判定成功后隔日滴入相同浓度的卵蛋白溶液，以加强致敏，正常对照组用生理盐水代替，方法同上。自造模成功第2天起，正常对照组及模型组用生理盐水滴双侧鼻孔，每侧10 μl，2次/d；鼻敏水组（治疗组）用鼻敏水滴鼻剂滴双侧鼻孔，每侧10 μl，2次/d；药物对照组用0.5%麻黄素地塞米松滴鼻剂滴双侧鼻孔，每侧10 μl，2次/d。连续用药10 d。
1.2 观察指标及方法
1.2.1 鼻部症状观察 采用症状积分叠加评分方法(见模型判定),比较组间差异。
1.2.2 鼻分泌物涂片检查 用自制微型小棉棒,伸入鼻腔轻擦取下鼻甲表面3次制作涂片,均匀地涂于载玻片上,行Hanse染色，镜检。
1.2.3 鼻甲黏膜组胺含量测定按钱彦方等［6］报道的方法测定。
1.2.4 形态组织学检查剪取鼻黏膜组织后，用10%的甲醛液固定，按常规脱水，石蜡包埋和连续切片，进行苏木素-伊红（HE）染色。光镜下观察组织学改变及嗜酸性细胞浸润情况。
1.2.5 血清嗜酸粒细胞检查最后滴鼻给药后过2 h用乙醚麻醉大鼠，断颈法处死动物，剪开腹腔，下腔静脉采血，静置2～3h后离心分离血清，置EP管中。运用日本产的KX21自动血球记数仪自动记数。
1.2.6 血清总IgE的测定IgE检测采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测，购自武汉博士德生物工程公司。严格按照试剂盒说明书步骤操作。
1.3 统计学处理所有实验数据均用±s表示，采用SPSS 10.0软件进行统计学分析处理。各组间差异比较用单因素方差分析。
2 结果
2.1 行为学表现 从表1可见给药前模型组与各给药组的症状积分比较无差异（P＞0.05），给药后各给药组与模型组的症状积分比较有显著差异（P＜0.01），鼻敏水组与药物对照组之间比较有显著差异（P＜0.01）。说明鼻敏水滴鼻剂能明显减轻实验性大鼠AR症状，且效果比药物对照组明显。
表1 鼻敏水对实验性变应性鼻炎大鼠行为表现的影响（略）
与正常对照组比较， ①P＜0.01；与模型组比较，②P＞0.05,③P＜0.01；与药物对照组比较，④P＞0.05，⑤P＜0.01；n=10
2.2 HE染色的组织形态结构正常对照组鼻黏膜结构清楚，黏膜上皮呈柱状排列，未见嗜酸粒细胞、肥大细胞浸润；模型组鼻黏膜下组织间质水肿，小血管扩张，血管内及组织中嗜酸粒细胞浸润明显；药物对照组鼻黏膜部分水肿，血管轻度扩张，固有层内可见散在或灶状以嗜酸性粒细胞为主的炎性细胞浸润；鼻敏水治疗组黏膜上皮基本完整，黏膜无明显水肿，固有层内见有极少量、散在的炎性细胞浸润。
2.3 鼻敏水对实验性变应性鼻炎大鼠鼻黏膜组胺含量的影响结果从表2可见正常对照组、各给药组与模型组的组胺含量比较有显著差异（P＜0.01），鼻敏水组与药物对照组之间比较有显著差异（P＜0.01）。结果见表2。
表2 鼻敏水对实验性变应性鼻炎大鼠鼻黏膜组胺含量的影响（略）
与正常对照组比较， ①P＜0.01，②P＞0.05；与模型组比较，③P＜0.01；与药物对照组比较，④P＜0.05;n=10
2.4 鼻敏水对实验性变应性鼻炎大鼠鼻分泌物嗜酸粒细胞的影响结果从表3可见正常对照组与各给药组和模型组之间的比较有显著差异（P＜0.01），各给药组与模型组之间的比较有显著差异（P＜0.01），鼻敏水组与药物对照组之间比较有显著差异（P＜0.01）。结果见表3。
表3 鼻敏水对实验性AR大鼠鼻分泌物嗜酸粒细胞的影响（略）
与正常对照组比较， ①P＜0.01；与模型组比较，②P＜0.01；与药物对照组组比较，③P＜0.01;n=10
2.5 鼻敏水对实验性AR大鼠血清嗜酸粒细胞的影响结果从表4可见正常对照组、各给药组与模型组之间的比较有显著差异（P＜0.01），各给药组与模型组之间的比较有显著差异（P＜0.01），鼻敏水组与药物对照组之间比较无统计学意义（P＞0.05）。
表4 鼻敏水对实验性AR大鼠血清嗜酸粒细胞的影响（略）
与正常对照组比较， ①P＜0.01，②P＞0.05；与模型组比较，③P＜0.01；与药物对照组比较，④P＞0.05;n=10
2.6 鼻敏水对实验性AR大鼠血清总IgE水平的影响结果从表5可见正常对照组、各给药组与模型组之间的比较有显著差异（P＜0.01），各给药组与模型组之间的比较有显著差异（P＜0.01），鼻敏水组与药物对照组之间比较无统计学意义（P＞0.05）。
表5 鼻敏水对实验性AR大鼠血清总IgE水平的影响（略）
与正常对照组比较， ①P＜0.01，②P＞0.05；与模型组比较，③P＜0.01；与药物对照组比较，④P＞0.05;n=10
3 讨论
变应性鼻炎 (AR)是IgE介导的I型变态反应性疾病，主要临床表现有鼻塞、流鼻涕、鼻痒、打喷嚏以及嗅觉功能障碍等。在参与变应性鼻炎发病机制的过程中组胺起着中心作用，它由肥大细胞和嗜碱粒细胞受刺激后脱颗粒产生，作用于H1受体引起血管扩张、渗透性增高及腺体分泌以及神经反射等，组胺可引起变应性鼻黏膜炎的全部症状［7］。变应性鼻炎的一个重要病特征是局部鼻黏膜组织中嗜酸性粒细胞局部浸润，嗜酸性粒细胞是AR发病机制中重要的炎症效应细胞。消除或减少局部症状是变态反应性鼻炎的诊断和疗效评定标准的主要内容［8］。的主要以抑制或降低IgE，阻断或减少各种介质的释放为主。变态反应性鼻炎在中医学中属于鼻鼽的范围，在《内经》中已多次论及本病。现代，较多的研究者认为本病的内因多为肺、脾、肾功能失调，外因则多为风寒邪作崇。多因肺气虚，卫表不固，腠理疏松，风寒之邪乘虚而入，寒邪凝滞于鼻窍所致。鼻敏水滴鼻剂系我科依据多年临床治疗经验组方而成，于197805应用于临床至今，疗效显著［9］，其由辛夷花、白芷、百部、牛蒡子、蒺藜、鱼腥草、地肤子、鹅不食草、荆芥、薄荷等药物组成。方中辛夷辛温，走气而入肺经，能助胃中清阳上行通于天，善祛风通窍，为治鼻渊、鼻塞不通良药；白芷辛温发表，芳香醒脑，通里达表，宣肺通窍，为治鼻塞、流涕之要药。荆芥、牛蒡子疏风宣肺；百部、蒺藜、地肤子疏风止痒；鱼腥草清热宣肺散结，全方具有祛风解表，发散风寒，消肿通窍的作用。本实验研究结果表明，鼻敏水滴鼻剂具有明显抑制或消除变应性鼻炎症状的作用，症状积分比较有显著差异（P＜0.01），说明鼻敏水为治疗变应性鼻炎有效药物之一。本实验研究结果表明，鼻敏水滴鼻剂能显著降低实验性AR大鼠鼻分泌物和血清中嗜酸粒细胞水平（P＜0.01），提示鼻敏水可能通过减少嗜酸性细胞的数量，从而减少强碱性的颗粒蛋白等炎性介质对细胞的损伤，降低变应性炎症反应。但鼻敏水组血清嗜酸粒细胞水平与药物对照组间比较无统计学意义（P＞0.05），可能与疗程短有关。本实验研究结果表明，鼻敏水滴鼻剂能显著降低实验性AR大鼠的鼻黏膜组胺含量（P＜0.01），提示鼻敏水可能通过抑制组胺释放，阻断组胺信息作用于鼻黏膜，使炎性细胞浸润减少、减轻组织反应，减轻变态反应症状而起治疗作用。本实验研究结果表明，鼻敏水滴鼻剂能显著降低实验性变应性鼻炎大鼠血清IgE水平（P＜0.01），提示鼻敏水可能通过抑制IgE产生或降低己合成的IgE水平，阻断其释放介质而达到治疗AR作用。但鼻敏水组血清IgE水平与药物对照组间比较无统计学意义（P＞0.05），可能与疗程短有关。目前的治疗主张将抗组胺药和鼻内皮质类固醇作为第一线治疗药物。但由于此类药物的使用具有一定的副作用而在临床上受到诸多限制。而中医耳鼻咽喉科集唐朝以来治疗本病的经验具有安全可靠，毒副作用小，疗效确切、稳定、持续，复发率低及治疗价格低廉等优势而成为近年来国内学者研究的热点。鼻敏水滴鼻剂为纯中药制剂，对AR有治疗作用，价格低廉，有利于广大患者的治疗。
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