液基薄片技术在胸腹水诊断中的应用
作者：韩旭东 柳杨 王西霞 陈晓艳
【摘要】 目的：研究液基薄片技术应用于胸腹水细胞学诊断的价值。方法：同一标本应用传统制片（CP）和液基薄片技术制作涂片，常规染色，并在显微镜下做比较。结果：诊断结果薄片阳性率、阴性率均高于传统制片，可疑、不满意涂片均低于传统制片，但只有不满意标本薄片与CP存在显著性差异；CP和薄片形态特征对比，薄片各方面质量均好于CP，且阅片时间明显缩短。结论：薄片和CP在检出率没有明显的区别，应用薄片技术制片质量提高，利于提高诊断的准确性。应用薄片技术阅片时间减少，提高工作效率，减轻了劳动强度，且可以重复制片，作特殊染色及免疫细胞化学等工作。其特点：成本较高，制片劳动强度稍大，时间较长。
【关键词】 液基薄片技术 细胞学诊断 恶性肿瘤
胸腹水是许多癌症患者的常见并发症，其细胞学检查对疾病的诊断有重要的意义。多年来，查找癌细胞主要应用传统制片方法，该方法存在着一些不利因素可能影响诊断，如背景不清晰、大量红细胞、炎性、渗出物及粘液，细胞涂片厚、面积过大、敏感性低等[1]。薄层细胞检测（Thin-layer cytology test）即液基薄片技术，是20世纪90年代起来的一项制片新技术，最初用于妇科宫颈细胞学，与传统涂片（CP）诊断相比，制出的玻片细胞结核清晰，背景明朗，不仅具有高度一致性，而且提高了上皮内病变的检出率[2～5]，其成果是显著的。但这项技术在非妇科方面（包括胸腹水细胞学诊断）的应用，在国内报道较少。我们在本院胸腹水细胞学诊断应用液基薄片技术，并与CP做一比较，探讨其应用价值。
1 材料与方法
1.1 材料
我院病理科2006年11月至2007年4月收集的胸腹水标本141份，每份均制备传统和薄片两种涂片，其中包括胸水78份，腹水63份。
1.2 方法
每份标本取液体40ml，平均分成2份离15min，2400r/min，弃去上清液。其中1份用来做CP两张，将另1份应用LPT方法制备薄片。LPT方法制片方法如下：分别加入3～4ml保存液，振荡器混匀倒入15ml离心管，振荡器充分混匀，离15min，2400r/min，弃去上清液，倒置试管吸干水分，加入细胞团2倍的细胞基液（如无细胞团加基液50μl），振荡器充分混匀，取50μl涂片、烘干，每例制薄片1张，必要时可重复。
两种涂片均在95%乙醇固定15min后HE染色，显微镜下观察，细胞分恶性组、可疑肿瘤组和良性组，恶性组包括腺癌细胞、鳞腺癌细胞、癌细胞及各种肿瘤细胞；可疑肿瘤组包括可疑癌细胞、又非典型的细胞。良性组包括不典型细胞、间皮细胞以及鳞状细胞。另有1组不满意标本即仅见红细胞或未见细胞。
1.3 统计学处理
采用SPSS 10.0统计软件进行统计学分析，组间差异采用卡方检验，以P＜0.05为有显著性差异，P＜0.01为高度显著性差异。
2 结果
2.1 CP和薄片诊断结果比较
2.1.1 在CP诊断结果中，恶性组31例（22.0%），可疑肿瘤组21例（14.9%），良性组80例（56.7%），不满意标本9例（6.4%）。
2.1.2 在薄片诊断结果中，恶性组39例（27.7%），可疑肿瘤组15例（10.6%），良性组86例（61.0%），不满意标本1例（0.7%）。
2.1.3 恶性组中薄片比CP多8例，可疑肿瘤组中薄片比CP少6例，良性组中薄片比CP多6例，不满意标本薄片比CP少8例。经统计学处理，不满意标本薄片与CP存在显著性差异，其余结果无显著性差异。
2.2 CP和薄片形态特征对比
2.2.1 薄层涂片背景中红细胞、炎细胞和细胞碎片较少，细胞分布均匀，重叠现象较少，细胞形态保存完好，且片段也保存完好，不满意标本涂片数量少。在细胞形态上，与CP涂片相比：细胞小且无退变现象。良性细胞呈一致性，细胞核呈圆形、椭圆形，核膜清晰且光滑，染色质匀细，着色浅，可见细小的核仁。恶性细胞，细胞大小不一，核质比增大，细胞核形态多样，其核膜凹凸不平，核膜厚，染色质粗，集结呈粗粒状团块状，并见明显的核仁。细胞质在两种涂片未见明显区别。
2.2.2 两者均应用HE染色，液基薄片比CP涂片易着色。
2.2.3 阅片时间上，因为CP每例均涂两张涂片，1例阴性涂片阅完约需4～5min，1例阳性涂片阅完约需5～7min。液基薄片因为细胞被集中在2cm大小的范围内，1例阴性涂片约需1～2min，1例阳性涂片约需3～5min。
3 讨论
薄层细胞检测是90年代起来的一项制片新技术，已成功地应用于妇科细胞学，在非妇科方面的应用国内报道较少。我们在应用这一技术于本院胸腹水细胞学诊断，并与CP做了比较。
在检出率方面恶性组中薄片比CP高5.7%，可疑肿瘤组中薄片比CP低4.3%，良性组中薄片比CP低4.7%，但无统计学意义。故可以认为薄片和CP在检出率没有明显的区别，对恶性肿瘤的检出率提高没有显著的作用，在确诊率的提高方面没有显著作用，这与报道相符。[1]而在不满意标本薄片与CP比较减少8例（5.7%），经统计学处理，不满意标本薄片与CP存在显著性差异。这说明，应用薄片技术制片不满意标本明显减少，制片质量明显提高，这些都有利于提高诊断的准确性，对细胞学诊断有积极意义。
薄层涂片背景干净，细胞分布均匀，结构清晰，形态保存完好，重叠现象较少，各种干扰明显少于CP（尤其是对肿瘤细胞干扰及挤压），阅片时对细胞特别是肿瘤细胞的识别更加准确，更加易于阅片。[6]这些是因为LPT保存液、清洁液具有使粘液与细胞分离，避免阳性细胞堆积和丢失，同时可去除有诊断价值以外的组织碎片、粘液、红细胞、杂质，轻松处理大量粘液、红细胞标本，能够保留全部有诊断价值的细胞成份及其完好的细胞形态。LPT的细胞基液能够将细胞完美黏附包裹，完全保持细胞的鲜活性，并使细胞均匀悬浮，保证标本的随机性和代表性。制片时，靠细胞的表面张力自由打开，形成一张细胞均匀分布、背景清晰的单层涂片。高质量的涂片是高质量诊断的良好基础。
薄层涂片应用于体腔积液，使原来CP需涂在几张涂片的细胞，集中在一个直径2cm大小没有红细胞背景的范围内，涂片背景干净，细胞分布均匀，结构清晰，阳性涂片阅片时间由原来的5～7min减少到3～5min，阴性涂片由原来的4～5min减少到1～2min，提高工作效率，减轻了劳动强度。同时，由于薄片将标本储存于保存液中，还可以用来重复制片，也可作特殊染色，如免疫细胞化学等[7]。因其背景干净，减少了非特异性着色，该技术也可用作DNA倍体图象分析，荧光原位杂交等，使得细胞学工作深入到分子水平，便于各项实验取材[1]。
薄片技术也有它的缺点：制片时标本需充分振荡并需离心15min除去红细胞等成分，再加入细胞基液振荡器充分混匀，手工制片，所以制片时间比CP相对延长，制片的劳动强度稍大。另外，薄片技术成本较高，不是所有患者都能接受的。故薄片技术的应用时应有一定的选择性。
【文献】
[1] 张智慧，孙耘田．薄片技术在体腔积液诊断中的应用[J]．中华病杂志，2002，31：360～361．
[2] Awen C , Hadlways,Eddy w ,et al.Efficacy of thihperp preparation of cervical smears:a 1000-case investigator-sponsored study.Diagn Cytopathol,1994,11:33～36.
[3] Hutchinson ML,Cassin CM,Ball HG 3rd.The efficacy of an automated preparation device for cervical cytology.Am J Clin Pathol,1991,96:300～305.
[4] Hutchinson MI Agarwal P ,Denault T,et al.A new look at cervical cytology.Thinprep multicenter trial results.Acta cytol,1992,36:499～504.
[5] Wilbur DC,Cibas ES,Merritt S,et al.Thinprep processor.Clinical trials demonstrate an increased detection rate of abnormal cervical cytologic specimens.Am J Clin Pathol,1994,101:209～214.
[6] 张培谊。TCT技术在胸腹水恶性肿瘤诊断中应用[J]。临床与实验病理学杂志，2005，20（3）：357～358．
[7] Nasser IA,Fogt F,Bardawil RG,et al.Enterogenous cyst of the spinal cord.Acta Cytol,1993，37:815～816．
