海尔福对铅中毒小鼠治疗效果的实验研究

            作者：覃淑云，韦启后，张树球，方晓燕，陈建海 

【摘要】  目的 探讨海尔福对铅中毒小鼠的效果及作用。方法 将30只健康昆明小白鼠随机分为染铅组（腹腔注射醋酸铅40mg/kg·d-1，4周）、治疗组(腹腔注射醋酸铅40mg/kg·d-1 +Haierfu 2ml/d)及对照组（腹腔注射等量的生理盐水）。染铅组灌胃4周于第0、4、8周，用水迷宫试验测试学习记忆能力1次。实验结束时处死小鼠，测定小鼠学习记忆情况；取血、肝、肾、股骨、尿液、粪便测定铅含量；取脑组织常规切片，光镜观察。结果 染铅组小鼠的学习记忆能力受阻碍，治疗组学习记忆明显改善，铅排泄量明显升高；而治疗组脑组织结构病变比染铅组明显减轻（P均<0.05或0.01）。结论 海尔福具有驱铅、改善学习记忆能力、保护脑组织的作用。

【关键词】  小鼠；铅中毒；海尔福；治疗结果；动物实验

　　Abstract:  Objective  To outline the curative efficacy of Haierfu on mice with lead poisoning.  Methods  Thirty healthy Kunming mice were randomly divided into three groups: the lead group (intraperitoneal injection with lead acetate 40mg/kg·d-1 for four weeks)，the Haierfu-treated group (intraperitoneal injection with lead acetate 40mg/kg·d-1 plus Haierfu 2ml/d) and the control group (intraperitoneal injection with isodosage of normal saline).Haierfu was used as the medicine for 8-week treatment.In lead group，a spatial water maze test was conducted to detect the mice ability of learning and memory on weeks 0，4 and 8.At the end of the experiments，the mice were killed and the content of lead (plumbum，Pb) in blood，liver，kidney，femur，urine and feces were determined；sliced mice brain tissues were observed under the light microscope.  Results  The ability of learning in Haierfu group was better than the lead group.Haierfu could facilitate lead elimination and thus lessen lead accumulation in blood，liver，kidney，femur，urine and feces.Comparing with the Hairfu group，the brain tissue could be induced damage obviously in the lead group by observation under the light microscope.  Conclusion  Haierfu could improve learning and memory ability of mice exposed to lead and play a protective role in brain.
   
　　Key words:  mice；lead poisoning；Haierfu；treatment outcome；animal experiment

　　铅中毒是一种常见的职业病，近年来随着城市化进程，铅对环境污染日益严重。铅毒性的主要靶系统为血液系统、神经系统、泌尿系统、生殖系统。目前临床采用西药依地酸钠钙、二巯基丁二酸钠等络合剂治疗铅中毒，其排铅效果虽好，但对人体的毒副作用大。因此，寻找一种对人体无毒副作用的排铅产品具有十分重要的意义。

　　1  材料与方法

　　1.1  动物  实验动物购自本院实验动物中心的昆明小白鼠，雌雄各半，体重18～22g，随机分为染铅组、治疗组、对照组3组，每组10只。置于代谢笼，收集尿和粪便。

　　1.2  实验方法  染铅组腹腔注射醋酸铅40mg/kg，每天1次；海尔福治疗组每日腹腔注射醋酸铅40mg/kg加海尔福2ml；对照组腹腔注射等量生理盐水；连续染毒8周。

　　1.3  药品、试剂和仪器  醋酸铅(分析纯，西安化学试剂厂，生产批号:00920)；中药海尔福口服液由本课题组研制，主要成分有茯苓、银花、甘草等中药组成，由容县星火饮料厂生产（桂卫食准字：［93］075号）提取精制而成。具有排氟、砷、镉等微量元素在体内过量沉积的作用［1，2］，对人体无毒副作用；浓硝酸(分析纯，开封东大化工试剂厂，生产批号：XK13-2010321)；高氯酸(分析纯，天津东方试剂厂，生产批号：XK13-2010102)；原子吸收光谱仪(BH2100，北京博晖创新光电技术股份有限公司)。

　　1.4  观察指标

　　1.4.1  小鼠一般情况  观察小鼠的精神状况皮毛等。

　　1.4.2  铅含量测定  试验结束时，断尾及眼球采血，随后断头处死动物，立即取股骨、肾脏，以体积3∶1（体积分数）的浓硝酸:高氯酸加热消化，用火焰原子吸收分光光度法测定各组织铅含量；消化处理后，用无火焰原子吸收分光光度法测定尿铅含量；取40μl全血，加入盛有0.36ｍl稀释液的离心管内混匀，取30μl在石墨炉原子吸收分光光度法测定血铅含量；粪便干燥、消化后用石墨炉原子吸收光谱法测定粪铅的含量。

　　1.4.3  学习记忆能力测试  用Y水迷路法［3］，分别在治疗前(0周)、治疗后4、8周进行实验。以15ｓ内直接抵达平台为正确反应。每个实验日训练8次，记录正确反应次数及每次到达平台所需时间。

　　1.4.4  脑组织切片观察  常规HE染色，光镜观察组织结构变化。

　　1.4.5  统计处理所有的数据用SPSS 11.0统计软件进行t检验、方差分析。

　　2  结果  

　　2.1  小鼠一般情况  染铅组小鼠有精神较萎靡、消瘦，皮毛不太整洁，有些掉毛现象。治疗组与对照组差异无显著性。

　　2.2  各组小鼠铅含量变化  组排泄铅（尿铅、粪铅）均高于染铅组(P<0.01)、肾、骨中铅含量明显低于染铅组（P<0.05或0.01），见表1。

　　2.3  水迷路实验结果  染铅组的小鼠学习记忆能力受障碍，治疗组的学习记忆明显改善(P<0.05或0.01)，见表2。

　　表1  各组小鼠排泄物及组织内铅含量（略）

　　与染铅组比较，a:t=33.32，b:t=26.60，d:t=2.72，e:t=59.98，P均<0.01，c:t=2.27，P<0.05；与对照组比较，f:t=200.22，g:t=59.04，j:t=3.44，P均<0.01；h:t=0.91，i:t=1.63，P均>0.05

　　表2  各组水迷路实验正确反应数、到达平台所需时间比较（略）

　　与染铅组比较，a:t=0.07，P>0.05；b:t=2.69，P<0.05；c:t=3.21，d:t=5.98，e:t=7.47，P均<0.01；与对照组比较，f:t=2.69，h:t=2.18，P均<0.05；g:t=3.34，P<0.01；i:t=1.45，j:t=1.76，P均>0.05

　　2.4  脑切片观察组织结构变化  治疗组大鼠脑皮质结构可见脑组织稍疏松，神经元周围间隙明显变窄，核小体少见，轻微髓鞘脱失，毛细血管周围可见少量的中性粒细胞浸润；对照组大鼠脑皮质结构可见神经元致密、清晰，排列紧凑，核小体、单核细胞少见，毛细血管充盈。

　　3  讨论

　　本实验中治疗组与染铅组比较时，治疗组尿铅、粪铅明显高于染铅组，而血、肾、骨铅含量却低于染铅组，说明海尔福具有驱铅作用，其机理可能是促进铅从泌尿系统及消化系统排出，从而降低铅在小鼠体内积蓄。所以脑组织在治疗组中的损伤明显减轻，学习记忆情况也有明显改善，是由于小鼠体内铅含量降低而直接消除铅毒作用。铅毒作用机理目前不甚明确，氧化应激是其重要机制，铅可直接诱导活性氧产生，影响细胞膜的保护作用，降低细胞正常的抗氧化功能［4］，从而导致机体细胞结构功能的损害。海尔福具有抗氧化、清除氧自由基作用［2］，使细胞免受铅介导氧化损害，从而起解毒作用。此外，海尔福富含锌、硒、钙等微量元素［5］。而硒是谷胱甘肽过氧化物酶的活性中心，是体内不可缺少的调控部分，能通过控制脂质过氧化来保护细胞和亚细胞结构，保护器官，在一定程度上减少铅的毒性［6］。染铅后脂质过氧化增强，而脑细胞富含脂质，易受自由基攻击而损伤［7］。所以治疗组脑组织损伤明显减轻。铅可影响神经系统的许多机能，但最主要影响记忆功能。铅暴露可引起钙平衡机制的破坏，可影响一氧化氮合酶(NOS)、钙依赖蛋白激酶C(PKC)的活性，可使神经递质谷氨酸(Glu)减少［8］，这些皆可损害LTP使其不能产生或维持，从而影响学习记忆功能。海马是学习记忆关键部位，而长时程增强效应(long-terpotentiation，LTP)认为是形成学习记忆过程细胞水平机制［8］，而锌在铅引起大鼠齿状回颗粒细胞LTP反应损伤起重要的保护作用［9］。此外，大鼠脑皮质结构可见脑组织疏松，散在脂肪变性，神经元被挤压变形，局部有胶质结节形成，皆对学习记忆完成产生影响。再者，机体总抗氧化能力降低，必然引起细胞老化，记忆力减退。脂质氧化增强和自由基增加可直接损伤各种酶类、载体、受体、通道和蛋白质，这不仅破坏各种神经功能同时也损害学习记忆。染铅小鼠在给予海尔福治疗后脑组织结构改变明显减轻，学习记忆能力有明显改善。考虑其机理可能为：①海尔福具有驱铅作用，降低体内铅的含量，改善细胞的内环境；②海尔福具有抗氧化、清除自由基作用［2］，海尔福富含锌、硒、钙等微量元素［5］，对抗脂质过氧化而保护脑细胞免受损害，而且能增加脑组织能量代谢，从而促进组织修复。

【】
  　　［1］ 张树球，李朝敢.职业性接触氟工人口服海尔福排氟情况观察［J］.广西医科大学学报，1999，16(5):655-656.

　　［2］ 覃淑云，韦启后，张树球，等.海尔福口服液对镉中毒小鼠肾脏保护作用的研究［J］.广西医学，2003；25(7):1113-1115.

　　［3］ 李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海:上海科技出版社，1991.174-175.

　　［4］ 郭碧花，张星海.抗氧化剂对铅毒防治的作用及机制探讨［Ｊ］.医学杂志，2004，17(2):100-104.

　　［5］ 李韬，张树球，卢彩珍，等.海尔福微量元素的测定分析［J］.右江民族医学院学报.1995，17(1):14-15.

　　［6］ 高秋华，周开炎.硒降低铅积蓄毒性作用［J］.微量元素与健康研究，1995，12(4):10-11.

　　［7］ 沈立.银杏叶提取物抗脑缺血作用的研究进展［J］.中国误诊学杂志，2003，3(7):996-999.

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