八角茴香药用成分的提取及其镇痛作用的实验研究

           作者：林洁，兰琪欣，韦应芳，廖兰艳，韦国锋  

【摘要】  目的 研究八角茴香药用成分的提取工艺及其对小鼠的镇痛作用。方法 采用乙醇提取、乙酸乙酯等有机溶剂萃取八角茴香，经大孔吸附树脂柱分离，得到白色精细粉末的莽草酸，并对莽草酸进行化学定性分析，镇痛实验采用扭体法和温浴法，观察腹腔注射莽草酸溶液（莽草酸组）后小鼠痛阈潜伏期和扭体反应的次数，设阿司匹林和生理盐水为对照组。结果 八角茴香含有莽草酸成分，其提取物对扭体法致小鼠疼痛的镇痛作用与生理盐水组比较差异有显著性（P<0.05）；在给药后20min、60min痛阈潜伏期也比生理盐水组明显延长(P<0.05），但与阿司匹林组比较差异无显著性（P>0.05）。结论 八角茴香中含有莽草酸，对小鼠具有明显的镇痛作用。

【关键词】  八角茴香；植物提取物；镇痛；小鼠；动物实验

　　Abstract:  Objective   To investigate the procedures of extracting medicinal components of star anise and its analgesia on mice.  Methods  Star anise were extracted from Illicium verum  Hook.f. using ethanol and ethyl acetate as solvents. After macron absorption resin layer separation, a kind of white fine powder shikimic acid were obtained.  The extracted shikimic acid were determined for chemical qualitative analysis. Writhing test and warm bathing test were performed and observed the mice pain threshold latency and writhing reaction times after giving peritoneal shikimic acid extraction solutions (shikimic acid group). Aspirin and  normal saline were used as controls.  Results  The shikimic acid components can be obtained from star anise. Compared to normal saline group, the shikimic acid group had better analgesic function (P<0.05), 20 minutes and  60 minutes after drug administration pain threshold also prolonged ( P<0.05), but compared to Aspirin group, there was no statistical significant difference (P>0.05).  Conclusion  Satar anise contains  shikimic acid which has effective analgesia on mice. 
   
　　Key words:  Anise, star; plant extracts; analgesia; mice; animal experiment

　　八角茴香为木兰科植物八角茴香lllicium verurm Hook.f.的果实，其味辛、甘、温，入脾、肾经，具有温阳、散寒、理气之功效。主治中寒呕逆，寒疝腹痛，肾虚腰痛，干温脚气［1］。由于资源丰富，具有较强的药理作用，深受人们的青睐。近年来的研究表明［2］，莽草酸具有抑菌、升高白细胞、镇痛作用以及其他茴香醚具有雌激素样作用和较强致敏作用。笔者主要对八角茴香镇痛成分的提取工艺及对小鼠的镇痛作用进行研究。

　　1  材料与方法

　　1.1  实验材料  八角茴香：采自广西德保县。动物：小白鼠由本院实验动物中心提供。仪器：电热恒温水浴锅，北京长原实验仪器厂；秒表，上海秒表厂；鼠筒，自制；2FA02-旋转蒸发仪，上海玻璃仪器；层析柱。试剂：乙醇；阿司匹林片，广西南宁制药正业集团公司生产；醋酸；丙酮；乙酸乙酯；生理盐水；甲醇。

　　1.2  实验方法

　　1.2.1  八角茴香中莽草酸的提取与分离［3］  八角茴香200g→1500ml CH3CH2OH回流3次→30min/次→过滤，合并滤液→减压浓缩→褐色浸膏→乙酸乙酯于50℃浸泡2次，40min/次→过滤→残渣物，用乙醇溶解，上大孔吸附树脂柱，用丙酮-甲醇洗脱，活性炭脱色，精制得白色固体，即莽草酸。

　　1.2.2  化学定性分析  莽草酸为白色精细粉末，易溶于水。与FeCl3反应呈紫色；能使溴水褪色。

　　1.2.3  提取物的镇痛试验

　　1.2.3.1  小鼠镇痛实验扭体法  方法按［4］。取小白鼠60只，体重为16～18g，雌雄不拘，随机分为三组，每组20只。分别腹腔注射八角茴香提取物（莽草酸组）、阿司匹林和等量生理盐水各组1ml/只，1h后各鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml，观察15min内小鼠扭体数。

　　1.2.3.2  小鼠镇痛实验温浴法  方法按［4］。取39只小白鼠，体重为16～18g，雌雄不拘，随机分为三组，每组13只。分别于腹腔注射莽草酸、阿司匹林和等量生理盐水各组1ml/只。用特制笼装置，将小鼠装入固定的筒内，然后把小鼠尾部浸入50℃的水浴中，以尾部回缩作为痛反应，以在盐水浴中反应时间延长表示痛阈潜伏期延长。观察给药前和给药后20min、30min、60min的痛阈潜伏期。

　　1.3  统计学处理方法，计数资料采用χ2检验，计量数据以±s表示，采用t检验。

　　2  结果

　　2.1  八角茴香提取物对扭体法致小白鼠疼痛的影响  八角茴香提取物对扭体法致小鼠疼痛具有显著的镇痛作用，与生理盐水组比较差异有显著性（P<0.05），见表1。

　　2.2  八角茴香提取物对温浴法致小鼠疼痛的影响  莽草酸组给药后20min、60min痛阈潜伏期比生理盐水组明显延长，与阿司匹林组比较差异无显著性，见表2。

　　表1  八角茴香提取物对扭体法致小鼠疼痛的影响（略）

　　与生理盐水组比较，a:χ2=6.64，P<0.05；与阿司匹林组比较，b:χ2=2.67，P＞0.05

　　表2  八角茴香提取物对温浴法致小鼠疼痛的影响（略）

　　与生理盐水组比较,a:t=2.26，P<0.05，b:t=0.77，P>0.05，c:t=2.17，P<0.05；与阿匹林组比较，d：t=0.68，e：t=0.14，f：t=1.18，P均>0.05

　　3  讨论
       
　　八角茴香中含有多种活性成分，例如反式茴香脑、黄酮类和莽草酸等化合物。本次实验通过对八角茴香中的莽草酸进行提取，实验结果表明，用大孔吸附树脂对八角茴香中提取分离莽草酸是可行的。本方法具有操作方便、产品纯度好、含量高的特点，具有推广应用的价值。
   
　　镇痛实验表明，莽草酸能减少小鼠扭体的次数，与生理盐水组比较差异有显著性(P＜0.05)；温浴法试验结果也表明，八角茴香提取物对小鼠疼痛反应有抑制作用，给药后20min、60min痛阈潜伏期明显延长，与生理盐水组比较差异有显著性（P＜0.05），但与阿司匹林组比较差异无显著性（P>0.05）。通过实验提示从八角茴香中提取到的莽草酸物质对小鼠具有显著的镇痛作用。

【文献】
  　　［1］ 全国中药汇编写组.全国中药汇编［M］.北京:人民卫生出版社，1975：275.

　　［2］ 马怡，孙建宁，徐秋萍，等.莽草酸对血小板聚集和凝血的抑制作用［J］.药学杂志， 2000，35(1):18.

　　［3］ 孙快麟，尤启冬.从八角茴香分离莽草酸的简单方法［J］.药杂志，1988，11(3):27.

　　［4］ 徐淑兰，卞如濂，陈修.药理实验方法［M］.2版.北京：人民卫生出版社，1991：695-700.