六种杀菌剂对当归褐斑病菌室内毒力的测定

             作者：王艳，陈秀蓉，王惠珍，朱田田，夏月红 

【摘要】  目的 测定噁醚唑、丙森锌等6种药剂对当归褐斑病菌的室内毒力，从而为当归褐斑病的防治提供药剂筛选依据。方法 采用生长速率法和抑制孢子萌发法。结果 生长速率法测定结果为：10 %噁醚唑、70 %丙森锌抑菌效果均在95 %以上，EC50分别为0.0004 mg/L和1.1025 mg/L，50 %多菌灵最差，抑菌效果不及26 %。孢子萌发法测定结果为：10 %噁醚唑1800倍和70 %丙森锌800倍抑菌率分别为74.76 %和89.91 %，EC50分别为0.2460 mg/L和0.0527 mg/L，50 %多菌灵抑制作用亦最低。结论 10 %噁醚唑、70 %丙森锌对当归褐斑病菌菌丝生长和孢子萌发抑制效果最好，可杀得和甲基硫菌灵次之，20 %二氯异氰尿酸钠和50 %多菌灵抑制效果最差。

【关键词】  当归；褐斑病；室内毒力；测定

    当归是伞形科当归属植物Angelica sinensis(Oliv) Diels. 的地下根及根茎，有补血、活血、调经、润燥等功用[1]，临床用量大，出口量大。随着栽培年限的增加，病原的逐渐积累，当归病害发生日趋严重，成为制约其产量和品质的一大因素。当归褐斑病是当归的主要叶部病害[2]，据调查，岷县药材示范园及城部大田褐斑病发病率100 %，严重度3级，渭源、嶂县发病率87 %～95 %，严重度3～7级。为了寻求、安全、有效的新型防治药剂，2006年至2007年我们对噁咪唑、丙森锌等6种药剂作了室内毒力测定，试验结果如下。

    1  材料与方法

    1.1  供试药剂

    10 %噁醚唑（世高）水分散颗粒剂（瑞士先正达作物保护有限公司）；53.8 %可杀得干悬浮剂（美国固信公司）；20 %二氯异氰尿酸钠（菜菌清）可溶性粉剂（威海韩孚生化农药有限公司）；50 %多菌灵磺酸盐可湿性粉剂（运城绿康实业有限公司）；70 % 丙森锌（安泰生）可湿性粉剂（拜耳作物公司）；50 %甲基硫菌灵（瑞托）悬浮剂（深圳市瑞得丰农药有限公司）；以蒸馏水作对照（CK）。

    1.2  筛选供试培养基

    选用当归煎汁(100 g叶片+1000 mL水煮+17 g琼脂)、菠菜煎汁(含100 g/L鲜叶)、燕麦片、PDA、PSA、VBC、PYA、WA、Richard、PDA+2.5 ‰脯氨酸、Czapek培养基、葡萄糖酵母浸膏培养基、玉米粉蔗糖培养基[3]共13种供试培养基，将直径7 mm的菌块分别接种于供试培养基上，每处理3皿，25 ℃下培养。筛选出菌丝生长较快的培养基。

    1.3  不同药剂对菌落生长的影响

    采用生长速率法[4]观察。

    1.3.1  供试菌种

    当归褐斑病菌采自甘肃岷县病株，症状典型，经镜检病原菌为褐斑病菌（Septoria sp.），经PDA分离，24 ℃培养，菌龄7 d后纯化，4 ℃下PDA斜面保存，实验时PDA平板扩繁，7 d后用7㎜打孔器切取菌饼备用。

    1.3.2  菌液配制和带药培养基制备

    按试验要求称取药剂，配成不同质量浓度的母液，分别吸取10 mL母液加入到90 mL、温度为50～60 ℃的PDA培养基中，摇匀，配成不同质量浓度的药剂培养基平板。待培养基凝固后，接入直径为7㎜的菌饼，置于培养基中央，重复4次，24 ℃下培养，对照为空白PDA培养基。

    1.3.3  测定结果

    接菌后每隔4 d用十字交叉法测定菌落直径，直到对照菌落满皿。不同质量浓度供试药剂对当归褐斑病菌的抑制率，应用DPS软件求出各单剂毒力回归方程、EC50。

    抑制率(%)=(对照菌落直径－处理菌落直径)/对照菌落直径×100 ％

    1.4  不同药剂对孢子萌发的抑制作用

    1.4.1  供试菌种

    将PDA斜面试管中保存的当归褐斑病菌在PDA+2.5 ‰脯氨酸平板上扩繁，待菌落表面大量产生分生孢子器和分生孢子后，检查孢子萌发情况，再进行试验。

    1.4.2  配制孢子悬浮液

    挑取培养基上分生孢子器，加少量不同质量浓度的药液，压碎孢子器，释放出分生孢子，再加药液使孢子浓度适中，即每视野（10×10倍）中有15～20个孢子，以便孢子萌发和观察。对照用无菌水。

    1.4.3  镜检

    将孢子悬浮液制片，25 ℃下悬滴培养，分别于4，8，12，24，36，48，60，72 h后检查孢子萌发率，检查的孢子数不少于300个，需20个视野，每视野孢子数不多于20个，不同药剂对孢子萌发的抑制率。

    2  结果与分析

    2.1  供试培养基筛选

    见表1。结果表明，PDA、PSA、脯氨酸的菌落生长显著且极显著地高于其他培养基；PDA+2.5 ‰脯氨酸的产孢量极显著地高于其他培养基。故室内药剂毒力测定选用PDA+2.5 ‰脯氨酸培养基。表1  不同培养基对菌丝生长和产孢的影响注：表中数字后的字母为P<0.01水平上的差异显著性分析。

    2.2  不同药剂对病菌菌丝生长的抑制作用

    见表2。结果表明，噁咪唑、丙森锌等6种药剂对当归褐斑病菌的生长均有不同程度的抑制作用，且随着药剂质量浓度的增加抑制率增加。10 %噁醚唑、70 %丙森锌对当归褐斑病菌的抑菌效果最好，10 %噁醚唑2100倍液和70 %丙森锌1000倍液抑菌率分别为95.4 %和98.4 %；其次为可杀得和甲基硫菌灵，400倍液抑菌率分别为41.5 %和40.7 %；20 %二氯异氰尿酸钠和50 %多菌灵抑菌效果最差，400倍液抑菌率分别为28.2 %和25.7 %。结果表明，10 %噁醚唑、70 %丙森锌抑制作用最强，EC50分别为0.0004 mg/L、1.1025 mg/L，可杀得次之，EC50为2.5865 mg/L。表2  不同药剂对病菌菌丝生长的抑制作用

    2.3  不同药剂对孢子萌发的抑制作用

    见表3。结果表明，噁咪唑、丙森锌等6种药剂对孢子萌发均有不同程度的抑制作用，且随着药剂质量浓度的增加，抑制率增加。10 %噁醚唑、70 %丙森锌对孢子萌发的抑制效果最好，10 %噁醚唑1800倍和70 %丙森锌800倍抑菌率分别为74.76 %和89.91 %；可杀得和甲基硫菌灵次之，1000倍抑菌率分别为58.19 %和54.94 %；20 %二氯异氰尿酸钠和50 %多菌灵抑制效果最差。结果表明，10 %噁醚唑、70 %丙森锌抑制作用最强，EC50分别为0.2460 mg/L、0.0527 mg/L；甲基硫菌灵和可杀得次之，EC50为0.9026 mg/L和0.9113 mg/L；50 %多菌灵抑制作用亦最低。表3  不同药剂对病菌孢子萌发的抑制作用

    3  讨论

    室内毒力测定结果表明，6种供试药剂对当归褐斑病菌菌落生长和孢子萌发均有不同程度的抑制作用，且随着药剂质量浓度的增加抑制作用加强，其中10 %噁醚唑、70 %丙森锌对当归褐斑病菌菌丝生长和孢子萌发抑制效果最好，可杀得和甲基硫菌灵次之，20 %二氯异氰尿酸钠和50 %多菌灵抑制效果最差。

    在室内测定中选用世高2100倍液和安泰生1000倍液为最高质量浓度，抑制率均在95 %以上，生产中可进一步稀释，以降低成本，最适质量浓度有待大田进一步试验。生产中还可选用价格较低的可杀得。

【】
  [1]国家药典编委会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学出版社,2005：190.

[2]韩金生.药用植物病害[M].吉林:吉林技术出版社,1994:240-241.

[3]方中达.植病研究方法[M].北京：农业出版社，1979:146-148.

[4]黄彰欣.植物化学保护实验指导[M].北京:农业出版社,1992:35-36.