长生科技冻干水痘减毒活疫苗的安全性及免疫原性研究

                    作者：陆小军，周伟忠，顾凯风，朱凤才 

【摘要】  目的：评价长生科技冻干水痘减毒活疫苗的安全性及免疫原性。方法：按随机、双盲的抽样原则，以国产同类疫苗作为对照，在江苏省涟水县720名1～12岁儿童中开展现场临床试验，比较两种疫苗免疫后临床反应率及抗体阳转率、保护率、几何平均滴度（GMT)。结果：所有受试者经试验疫苗免疫后，全身总发热反应率为8.33%，局部反应总反应率为2.08%；抗体GMT为1∶52.23，抗体阳转或成功率为97.12%。试验组与对照组间全身反应、局部反应、免疫后抗体 GMT、阳转率、免疫成功率及4倍增长率均无显著性差异。结论：长生科技冻干水痘减毒活水痘疫苗对受试人群具有较好的安全性和免疫原性。

【关键词】  冻干水痘减毒活疫苗； 安全性； 免疫原性

    水痘是由水痘带状疱疹病毒(VZV)引起的一种急性传染病，传染性很强，易感儿童接触后90％发病，以全身症状和皮肤黏膜上分批出现斑疹、丘疹、水疱和结痂为特征，可并发继发性皮肤感染、肺炎、脑炎、心肌炎、肝炎和Reye综合征等；在免疫功能缺陷的成人和儿童中易形成播散型水痘，病死率极高［1］。水痘减毒活疫苗是唯一获准用于预防由人类疱疹病毒引起疾病的疫苗。1974年日本高桥（Takahashi M）等开始了VZV减毒活疫苗的临床研究。病毒分离自一名叫Oka的水痘患病男孩的水痘水疱液，通过豚鼠和人细胞培养传代减毒而获得Oka水痘病毒株，制备出减毒活疫苗。目前在世界各地广泛使用的水痘疫苗均为Oka株疫苗。许多临床试验证明，Oka株水痘疫苗接种反应轻微，能诱导机体产生良好的、持久的免疫应答和保护效果。本研究中疫苗用VZV减毒株（Oka株）接种人二倍体细胞株（2BS株），经培养收获病毒液并加适宜稳定剂后冻干制成。

    为探讨长春长生生物科技股份有限公司研制的冻干水痘减毒活疫苗的安全性和免疫原性，论证其生产与推广的可行性，根据国家药品监督管理局有关要求，2006年8月至11月，作者在江苏省涟水县进行了临床试验，评价该疫苗的临床反应性及免疫原性。

    1  材料与方法

    1.1  研究对象 

    以受试者（或其监护人）知情同意、自愿参加为原则，选择1～12岁常住健康儿童。受试者无水痘病史，无水痘疫苗接种史，7 d内无其他疫苗接种史，近3个月未接受过免疫球蛋白制剂，无疫苗接种禁忌证。

    1.2  疫苗

    1.2.1  试验疫苗

    为长春长生生物科技股份有限公司研制的冻干水痘减毒活疫苗，冻干剂型，规格为0.5 ml·瓶－1，每个包装为1人次，批号20050605，有效期至2006年12月18日。

    1.2.2  对照疫苗

    为上海生物制品研究所生产的水痘减毒活疫苗，冻干剂型，规格为0.5 ml·瓶－1，每个包装为1人次，批号2006040401，有效期至2007年11月18日。

    1.2.3  免疫程序及要求

    按照疫苗使用说明书接种。受试者的上臂外侧三角肌附着处皮肤用75%医用酒精消毒，待皮肤微干后皮下注射疫苗0.5 ml，疫苗使用前复溶并充分摇匀。

    1.3  研究设计

    本次试验设试验组和对照组，分Ⅰ期、Ⅲ期临床试验两阶段进行。

    1.3.1  第一阶段（Ⅰ期）临床试验

    6～12、1～5岁年龄组儿童各20名，接种1针冻干水痘减毒活疫苗，于接种后30 min及6、24、48、72h至10d详细观察全身、局部反应及异常反应的情况，无严重不良反应发生方可进入下一阶段临床试验，Ⅰ期临床试验完成期限为30～40 d。

    1.3.2  第二阶段（Ⅲ期）临床试验

    在Ⅰ期临床试验安全性确立的基础上，进一步扩大人群进行Ⅲ期，即双盲、对照、随机分组临床试验。接种试验疫苗的试验组480人，接种对照疫苗的对照组240人，按2∶1的比例将试验组和对照组进行随机编盲，并将受试者分为幼儿组（1～5岁）和少儿组（6～12岁）两个年龄组，每个年龄组的入选受试者按性别、年龄排序，所有受试者均编有唯一序列号，该序列号与疫苗编码一致，即受试者接种相应编码的疫苗。

    1.4  临床安全性研究

    Ⅰ期临床试验阶段接种后详细随访观察30 min及6、24、48、72 h至10 d的不良反应。Ⅲ期临床试验主动随访疫苗接种后30 min及6、24、48、72 h至42 d的任何不良事件。统计各组所有观察对象接种疫苗后的局部和全身反应情况。以全身发热反应和局部红、肿反应为安全性评价的主要指标，以其它全身反应如头痛、疲劳乏力、肌痛或关节痛、咳嗽、过敏反应（皮疹、荨麻疹、血管性水肿等）、恶心、呕吐、腹痛、腹泻等和局部反应如出疹、痒、疼痛等为安全性评价的次要指标。全身和局部反应按国家食品药品监督管理局关于《预防用疫苗临床试验不良反应分级标准指导原则》进行判定。

    1.5  免疫原性研究

    在疫苗免疫前、免疫后6周分别采集静脉血，分离血清，用膜抗原荧光抗体法（FAMA法）测定抗体效价。免疫前抗体效价＜1∶4为易感者，≥1∶4为非易感者；免疫前抗体效价＜1∶4、免疫后抗体效价≥1∶4为抗体阳转；免疫前抗体阴性或有低水平抗体，免疫后抗体阳转或≥4倍增长为免疫成功。

    1.6  资料的统计分析

    用Excel 2000软件录入并整理数据,SAS 9.1进行t检验、Pearson卡方检验或Fisher精确概率法检验,疫苗免疫后抗体几何平均滴度（GMT）数据经lg转换。

    2  结    果

    2.1  受试者基本信息

    Ⅰ期临床试验40名儿童中男女各20名，平均年龄5.25岁。Ⅲ期临床试验720名受试者中男女各360名，试验组平均年龄为5.20岁，对照组为5.33岁。试验组和对照组的年龄和性别构成差异无显著性。

    Ⅲ期临床试验720名受试者中，共采集免疫前后血清样本592套，采血率为82.22%；其中试验组392套，采血率为81.67%，对照组200套，采血率为83.33%。两年龄段的试验组和对照组受试者采血率差异无显著性（χ2＝0.30、P＝0.58）。受试者因免疫前抗体滴度≥试验最高2个稀释度或免疫前滴度＞免疫后滴度而剔除血清样本共11套（试验组10套、对照组1套）。

    2.2  免疫前易感者和非易感者比例情况

    6～12岁年龄段试验组与对照组免疫前易感者和非易感者比例差异有统计学意义，对照组的易感者比例高；1～5岁年龄段及两年龄段合计的试验组与对照组免疫前易感者和非易感者比例差异无统计学意义。

    2.3  临床安全性研究

    2.3.1  Ⅰ期临床试验安全性评价

    40名受试者在疫苗接种后30 min内均未观察到即时反应。试验疫苗接种后10 d的系统观察期内，1～5岁组20人中有3人出现发热反应，最高体温分别为37.3、37.7和38.2 ℃；1人第3天起双手大拇指出现1个对称性的水疱，1周后自行痊愈。6～12岁组没有观察到体温升高及其它异常反应。从接种第11天起至第6周止，每周对受试者进行随访，未观察到其它异常反应、偶合反应和任何有临床意义的不良事件。

    2.3.2  Ⅲ期临床试验安全性评价

    2.3.2.1  全身反应  试验组在疫苗接种后10 d的系统观察期内，全身总发热反应率为8.33%（40/480)，其中1～5岁组全身总发热反应率为9.37%（30/320)，6～12岁组全身总发热反应率为6.25%(10/160)；对照组在疫苗接种后10 d的系统观察期内，全身总发热反应率为11.25%（27/240)，其中1～5岁组全身总发热反应率为13.75%(22/160)，6～12岁全身总发热反应率为6.25%（5/80)。详见表1。全身其他反应:试验组6例发生皮疹，均发生在1～5岁组，发生率为 1.25%；对照组2例发生皮疹，也发生在1～5岁组，发生率为0.83%。

    2.3.2.2  局部反应  试验组接种疫苗后10 d的系统观察期内，局部反应总反应率为2.08%(10/480)，其中1～5岁组为1.56%(5/320)，6～12岁组为3.13%(5/160)；对照组在疫苗接种后10 d的系统观察期内，局部反应总反应率为3.33%(8/240)，其中1～5岁组为2.50%(4/160)，6～12岁组为5.00%(4/80)。详见表1。试验组和对照组的局部反应主要表现为红肿和疼痛，均在72 h内消退，均无重度及以上局部反应。从接种第11天起至第6周止，未观察到其它异常反应、偶合反应和任何有临床意义的不良事件。

    2.4  免疫原性研究

    2.4.1  水痘易感者疫苗接种后抗体动态情况   

    水痘易感者（免疫前抗体效价＜1∶4）经试验疫苗及对照疫苗免疫后，其抗体滴度均有不同程度的增长，GMT分别为1∶32.77和1∶36.87；试验疫苗和对照疫苗免疫后,其抗体阳转率分别为99.31%和99.30%。两组间抗体GMT及抗体阳转率差异均无统计学意义。见表2。表1  Ⅲ期临床试验受试者全身、局部反应情况例 注：括弧内为所占百分比表2  易感者Ⅲ期临床试验免疫后抗体GMT、阳转率分析注：表中GMT为数据经lg转换后的值

    2.4.2  水痘非易感者疫苗接种后抗体动态情况

    水痘非易感者(免疫前抗体效价≥1∶4)经两种水痘疫苗免疫后,其抗体滴度均有不同程度的增长，GMT分别为1∶231.87和1∶193.54；试验疫苗和对照疫苗免疫后,其抗体4倍增长率分别为90.11%和85.96%。两组间抗体GMT及4倍增长率差异均无统计学意义。见表3。表3  非易感者Ⅲ期临床试验免疫后抗体GMT、阳转率分析注：表中GMT为数据经lg转换后的值

    2.4.3  疫苗接种后抗体免疫成功情况

    受试者（易感者和非易感者）经两种水痘疫苗免疫后,试验组和对照组抗体滴度均有不同程度的增长，GMT分别为1∶52.23和1∶59.28，其抗体阳转或成功率分别为97.12%和95.48%，两组间差异无统计学意义，见表4。表4  受试者Ⅲ期临床试验免疫后抗体GMT、抗体阳转或免疫成功率分析注：表中GMT为数据经lg转换后的值

    3  讨    论

    与大多数国家一样，水痘在我国是非法定报告的传染病，我国的水痘感染率非常高。用血清流行病学方法调查发现，随着年龄的增长,抗体流行率很快上升,上海、福建、广州、深圳的平均VZV血清抗体流行率＞60％，≥10岁者的血清抗体阳性率大多达到80%以上［2- 3］。深圳的一项调查表明，1～5、6～10岁分别将近有88%、79%的儿童为水痘的易感者［4］。本次试验选择1～12岁年龄组进行观察,1～5、6～12岁组易感者比例分别为85.41%、54.41％。

    对VZV感染者主要是对症处理，无特效方法，而接种疫苗是最有效和最可靠的预防和控制水痘的手段。本次长生科技冻干水痘减毒活疫苗临床试验结果显示：所有受试者（易感者和非易感者）经试验水痘疫苗免疫后,其抗体滴度均有不同程度的增高,免疫成功率为97.12%；所有易感者经试验疫苗免疫后,抗体GMT上升为1∶32.77，抗体阳转率为99.31%。结果与报道［5- 8］基本一致。对非易感者也有较好的免疫效果，其抗体4倍增长率为90.11%。从两年龄段的抗体阳转率及免疫成功率来看，长生科技冻干水痘减毒活疫苗在1～12岁受试人群中具有较好的免疫原性。所有受试者经试验水痘疫苗免疫后,全身总发热反应率为8.33%，中反应率为2.29%，没有观察到严重反应。局部反应总反应率为2.08%，中反应率为1.04%；在1～5岁组有6例发生皮疹，发生率为1.25%。结果与文献报道［5- 8］基本一致。

    总之，本研究结果显示,此次观察的长生科技冻干水痘减毒活疫苗在1～12岁受试人群中具有较好的免疫原性和安全性，值得推广使用。

【文献】
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［3］张玮,杨卫路,梁建华,等.广州地区人群水痘带状疱疹病毒抗体阳性率调查［J］.中国卫生检验杂志,1999,9(3)：233- 234.

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