胎盘型谷胱甘肽S转移酶在胃癌中表达的意义

                   作者：高会斌 白金君 田亚汀 薄爱华

【摘要】  探讨胎盘型谷胱甘肽S转移酶（glutathione s?transfarase,GSTπ）在胃癌中表达的临床意义。方法：利用SP免疫组织化学方法，检测58例胃癌和40例慢性萎缩性胃炎患者组织中的阳性率。结果：GSTπ在胃癌和胃炎组织中的阳性率分别为74.14%（43/58）和37.50%（15/40），两者差异显著（P<0.05）。GSTπ在胃癌低分化组阳性率偏高，但无统计学意义（P>0.05）。淋巴结转移组阳性率高于无淋巴结转移组（P<0.05）。结论：GSTπ在胃癌组织中有较高表达，检测GSTπ对提示预后及指导化疗方案选择有指导意义。

【关键词】  胃炎 胃肿瘤 免疫组织化学 胎盘型谷胱甘肽S转移酶

    【ABSTRACT】  Objective：To study the clinical significance of glutathione s?transfarase?π.In gastric cancer.Methods:Positive rate of GSTπ for 58 cases with gastrac cancer and 40 cases with chronic atrophic gastritis was detected by SP immunohistochemical technique.Results:The positive rates of GSTπ were 74.14%(43/58)and 37.50%(15/40)in gastric adenocarcinoma group and gastritis group respectively.The positive rates of GSTπ in moderated poorly differentiated group were higher than that of well?differentiated group,but there was no significant difference(P>0.05).The positive rate of GSTπ of lymph metastasis group was significantly higher than that of no?Lymph metastasis group(P<0.05).Conclusion:Expression of GSTπ was higher in gastric cancer.The determination of GSTπ may be useful for the estimating of prognosis and establishment of chemical therapy planning in gastric carcinoma.

    【KEY WORDS】  Gastritis,Stomach Neoplasms,Immunohistochemistry,glutathione S?transfarase?π

    谷胱甘肽S转移酶（glutathiones?s?transfarase，GST）基因，由于编码蛋白质的分子量不同可以分为5个亚型（GSTα、GSTπ、GSTμ、GSTθ和GSTσ）,其中GSTπ（胎盘型谷胱甘肽酶）约占90%，它在消化管、卵巢、乳腺等上皮性癌瘤内有较高表达，而且与肿瘤发生和耐药关系密切[1～3]。为了探讨GSTπ在胃癌中过表达的临床意义，我们采用SP法检测胃炎和胃癌组织中GSTπ的阳性率，并分析GSTπ过表达的临床意义，为胃癌早期诊断和化疗方案的制定提供依据。

    1  材料和方法

    1.1  一般资料  于2004.1～2007.9月收集张家口市第五和河北北方学院附属第一医院肿瘤外科胃癌切除标本和消化内科钳取胃炎标本共计98例。胃癌患者58例，其中男40例，女18例，年龄32～77岁，平均年龄56.5岁。胃炎患者40例，均为慢性萎缩性胃炎，其中男26例，女14例，年龄27～70岁，平均年龄43岁。

    1.2  切片与染色

    1.2.1  切片制作  将新鲜标本固定于10%中性甲醛中过夜，常规乙醇梯度脱水，二甲苯透明和石蜡包埋，连续切片厚度5μm。部分切片常规HE染色用于病理诊断，其余切片37℃温箱待染。

    1.2.2  免疫组化染色  第Ⅰ抗体为兔抗人GSTπ血清，由美国MAXIM公司生产；SP免疫组化试剂盒及DAB显色剂购自北京中山生物技术公司。免疫组化染色程序严格按照试剂盒规定操作，阴性对照采用PBS代替一抗，阳性对照为已知食管癌GSTπ阳性切片。

    1.3  阳性结果判定  凡切片阳性细胞超过5%者即为阳性病例，否则为阴性。

    1.4  统计学处理  组间比较采用χ2检验，P<0.05为有显著性差异。

    2  结果

    GSTπ阳性细胞的胞质内呈棕黄色颗粒，癌细胞核及间质不着色。切片若经苏木精复染，癌细胞核及间质中细胞核均成灰蓝色。胃炎粘膜GSTπ阳性率为37.50%（15/40），胃癌组织GSTπ阳性率为74.14%（43/58），明显高于胃炎组（P<0.05）。GSTπ在胃腺癌高分化组阳性表达率为57.69%，中分化组阳性表达率为 90.00%，低分化组阳性表达率为86.36%，组间差异没有显著性（P>0.05）；有淋巴结转移组阳性表达率为92.31%，无淋巴结转移组为36.84%，两组间差异显著（P<0.05）。癌组织浸犯达浆膜组阳性表达率100.00%，明显高于侵及粘膜和侵及肌层组（P<0.05），详见表1。表1  GSTπ在胃炎和胃癌组织中的表达注：▲与萎缩性胃炎组相比P<0.05；※与无LN转移组相比P<0.05；△与侵及浆膜组相比P<0.05

    3  讨论

    GSTπ是一组具有解毒功能的酶类，在人体内是细胞抗损伤、抗癌变和抗毒物的重要酸性蛋白质，它的多种功能可以保护细胞免受毒物损伤。当不良刺激导致GST基因过表达时，往往伴随肿瘤发生，因此GST被喻为“一种新的肿瘤标志物”，监测人体组织中GST含量可以作为脑、结肠、肝、肺、肾、胃、和宫颈上皮是否恶变的标志物。因此众多临床工作者对GST检测结果十分重视。

    GST基因定位于11号染色体，其编码蛋白质—GSTπ是有两个多肽亚单位的二聚体蛋白质，每个亚单位由209个氨基酸组成，其分子上既有与GSH（谷光甘肽）结合位点，又有亲位点。在正常细胞GSTπ表达很弱，极少数细胞能被S?P方法测出。此次我们检测到萎缩性胃炎和胃癌标本GSTπ阳性率分别为37.50%和74.14%，两者差异有显著性（P<0.05），说明可能在胃炎逐渐加重，并向胃癌演变过程中GSTπ过表达现象也随之增高，因此提示GST可以作为胃癌发生的早期指标之一。癌细胞浸润深达浆膜组织和有淋巴转移组GSTπ表达更高，因此有研究认为GSTπ过表达可以做为提示预后不良的指标之一[4，5]，同时也有研究认为GSTπ也是耐药标志物之一[4]。

    目前研究表明，当致癌物质刺激细胞可导致GSTπ基因突变，编码GSTπ蛋白质增多，此时血液和某些器官中GSTπ含量增多。有人报告白血病耐药细胞株中GSTπ含量比正常细胞高10倍，在大肠癌、胃癌和卵巢癌中GST增高与病人耐药有密切关系[6，7]。有研究表明检测食道癌GSTπ阳性表达率80%以上，正常食道上皮阳性率仅3.9%，不典型增生的鳞状上皮阳性表达率为77.9%，因此认为GSTπ阳性可以作为筛选食道癌的重要指标[8]。

    关于GSTπ高表达导致癌细胞产生耐药性的问题是目前研究的热点之一。一般认为由于GSTπ能催化谷胱甘肽与化疗药物结合而解毒，同时GSTπ本身可以与亲脂性药物结合，增加其水溶性，促进药物外排速度，降低药物的细胞毒性。由于GSTπ具有过氧化物酶活性，可以使抗癌药物产生的过氧化物还原为无毒性物质，因此GSTπ导致癌细胞耐药性的机制是多途径的。有报道GSTπ过表达者对顺铂，阿霉素，氮芥，5?FU和环磷酰胺耐药性增高[9，10]。GSTπ高表达对紫杉醇的耐受性增高，若利用GST抑制剂，则可以增加胃癌细胞对紫杉醇的敏感性，因此目前认为GST过表达与胃癌组织的耐药性有密切关系。本研究提示在胃癌中GSTπ有较高的表达，它不仅是胃癌发生及预后不良的指标，而且检查患者GSTπ表达状况对临床化疗药物选择有指导作用。

【】
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3 高会斌，齐维娟，魏阿平,等.GSTπ在胃癌与癌周组织中的表达[J].山东医药，2007，47（27）：24?26

4 余震，龚建平.肿瘤抑制基因和耐药基因在肿瘤化疗中的应用进展[J].浙江临床医学，2004，6(8):732?733

5 鞠芳，王秀珍，马字真.GSTπ和LRP在胃癌中的表达及其临床意义[J].河北医学,2007,13(7):766?769

6 阙挺，杨莉芬，王文卿,等.大肠癌中P?gp、GSTπ、TopoⅡ的表达及临床意义[J].肿瘤，2005，25(2):163?165

7 罗敏，张世琼，吴彤.大肠癌组织中p?gp和GSTπ及TopoⅡ的表达及其临床意义的研究[J].中华肿瘤防治杂志，2007，14（15）：1152?1155

8 Labialle S,Gayet L，Marthinet E,et al.Transcriptional regulators of the human multidrug resistance l gene recent views[J].Biochem phamacol，2002,64(2):943?938

9 Borst P，Evers R.A family of drug transporters the multi?drug resistance associated proteins [J].Natl Cancer Inst，2000,92(1):1295?1302

10唐卫，李小菜，江勃华,等.大肠癌组织中TGF?β与pgp，GSTπ的表达与临床关系的研究[J].医学临床研究，2008，25（1）：1?4（责任编辑：李蓟龙）