涿鹿蒿不同方法提取液抗菌作用比较

                 作者：乔海霞 张玉妥 季建军 张彦霞 张建树 阎飞 马飞 董媛 张进顺

【摘要】  目的:研究涿鹿蒿水煎剂和醇提物的体外抗菌作用。方法:采用试管稀释法测定水煎剂和醇提物对13种临床常见病原菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果:涿鹿蒿提取物对10种细菌有不同程度的抗菌作用，而对3种真菌的抑菌效果较差。结论:涿鹿蒿提取物在体外对细菌有一定抑制作用。

【关键词】  中草药;体外发生;微生物敏感性试验；涿鹿蒿

    【ABSTRACT】  Objective:To study the anti?bacteral function of the ZhuoLu Artemisia extracts in vitro.Methods:The tube broth methods were used to investigate the anti?bacteral effects of 13 bacteria strains commonly from the clinic.Results:ZhuoLu Artemisia was shown differect bacteriostatic effects on the 13 bacteria strains,while no effect to 3 fungus strains.Conclusion:ZhuoLu Artemisia holds significant anti?bacteral effects on common pathogens in vitro.

    【KEY WORDS】  Chinese Herb,Ectogenesis,Microbial Sensitivity Tests,ZhuoLo Artemisia

    涿鹿蒿为菊科多年生草本蒿类植物，是河北省涿鹿县当地人的一种蔬菜珍品，目前对其研究甚少。我国发现的蒿类有200多种，其中1/3被药用，具有消炎、清热、解毒、活血、止血之效，为了进一步开发利用本地资源，我们对涿鹿蒿的体外抑菌作用进行了初步探究。

    1  材料与方法

    1.1  一般资料

    1.1.1  药材  涿鹿蒿干燥原植物。

    1.1.2  菌种  标准菌株:金黄色葡萄球菌(ATCC25923),大肠埃希菌(ATCC25922)，乙型副伤寒沙门菌，铜绿假单胞菌，大肠埃希菌，表皮葡萄球菌，痢疾志贺菌，鲍曼不动杆菌，嗜麦芽假单胞菌，肺炎克雷伯氏菌，金黄色葡萄球菌，变形杆菌，近平滑念珠菌，热带念珠菌，白色念珠菌，均购自北京生物制品检定所。

    1.1.3  培养基

    1.1.3.1  液体培养基  Mueller?Hinton(MH)肉汤。

    1.1.3.2  固体培养基  Mueller?Hinton(MH)琼脂，

    沙氏培养基。

    1.1.4  仪器  721分光光度计,培养箱,无菌超净工作台。

    1.2  方法

    1.2.1  涿鹿蒿水煎剂的制备  中药煎制:参照陈奇的方法[1]进行,取藜蒿粉碎，加蒸馏水浸泡30min后加热煮沸。开始用强火，沸腾后改用文火，保持微沸30min～1h，搅拌、趁热过滤。药渣再加蒸馏水煮沸30min，滤过。合并滤液，浓缩成含生药2g/mL的药物原液，灭菌后备用。

    1.2.2  涿鹿蒿醇提物的制备  参照陈奇的方法[1]进行，用60%乙醇提取，浓缩成含生药2g/mL的药物原液，灭菌后备用。

    1.2.3  菌液的制备

    1.2.3.1  标准比浊管配制  配制成0.5麦氏比浊，相当于5×(107～108CFU/mL)。其操作医学微生物学实验指导[2]。

    1.2.3.2  实验菌液制备  将实验所用13种菌的培养物（菌落）用无菌生理盐水制成菌液，浓度相当于0.5麦氏比浊。2008年6月乔海霞等：涿鹿蒿不同方法提取液抗菌作用比较表1  中药不同浓度的稀释方法表2  涿鹿蒿水煎剂对13种菌的最低抑菌浓度（MIC） 表3  涿鹿蒿醇提物对13种菌的最低抑菌浓度（MIC） 注：有病原菌生长 “+” 无病原菌生长“-”

    1.2.4  实验方法  两种提取物分别取无菌小试管5支作为一组,共13组,用MH 肉汤、沙保液体倍比稀释中药至待测的最低浓度见表1。另取3 支试管,分别标记为“MH 肉汤对照”,“药物原液对照”,“测试菌生长对照”。每只试管加入菌液0.1mL，摇匀，放置温箱内37℃，培养24h后观察结果，在对照管符合要求的情况下，将各实验管的培养物接种至相应培养基的琼脂平板上，确定是否有细菌生长。37℃，24h观察结果，以琼脂平板上完全无细菌生长的药物最高稀释度为最低抑菌浓度（MIC）。

    2  结果

    2.1  涿鹿蒿水煎剂对实验菌的最低抑菌浓度（MIC）见表2。

    表2结果显示：涿鹿蒿水煎剂对细菌的抑菌效果强于真菌。对球菌的抑菌作用明显，对表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌的MIC为0.5g/mL。对非发酵菌抑菌效果也较好，不动杆菌，嗜麦芽假单胞菌MIC为0.5g/mL，对肠杆菌科除乙型副伤寒沙门菌外MIC均为1g/mL，乙型副伤寒沙门菌对张家口药液明显耐药,其机理有待于进一步研究。对真菌的抑菌作用较弱，热带念珠菌MIC为1.5g/mL，对白色念珠菌，近平滑念珠菌无抑菌作用。

    2.2  涿鹿蒿醇提物对实验菌的最低抑菌浓度见表3。

    表3结果显示：涿鹿蒿醇提物对细菌的抑制作用强于真菌，对表皮葡萄球菌，金黄色葡萄球菌的MIC为1.0g/mL，对大肠埃希菌无明显抑制作用。

    3  讨论

    实验结果表明涿鹿蒿水煎剂和醇提物均有体外抗菌作用，涿鹿蒿有一定药用价值，是一种具有潜在开发利用价值的植物资源。涿鹿蒿水煎剂对葡萄球菌、大肠杆菌、非发酵菌的抑菌作用强于醇提物，在抗菌过程中应优先选择水煎剂。水煎剂对条件致病菌鲍曼不动杆菌，嗜麦芽假单胞菌的抑菌作用较好，MIC为0.5g/mL。

    本次实验预示了此药可能具有一定的临床应用前景,特别是针对条件致病菌引起的感染，在使用大量抗生素后产生耐药性菌株，是否可以联合此药来进行有效的治疗？因为中药和抗生素治疗感染性疾病的机制不一样,中医理论认为人体是一个有机整体，从抗感染的多个环节用药,综合治疗的作用结果必然可延缓致病菌群产生的耐药性,最终获得最佳治疗效果［3］。是否可用于临床抗感染治疗有待研究。

    本实验在体外进行,在体内能否达到有效抗菌浓度,控制感染,有待继续探讨，还有必要对藜蒿提取物的抑菌成分及机理作进一步研究,为开发和综合利用本地资源提供依据。

【参考】
  1 陈奇主编.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,1993.67?261

2 张玉妥,季建军.医学微生物学实验指导[M].北京:人民卫生出版社,2004.42

3 蔡璇,彭松,施金玲.5种中药对临床常见菌株的体外抗菌活性研究[J].医药导报2005,24(6):470?472