眩晕定方对兔血管性眩晕气虚血瘀证模型血液流变学和脑血流图的影响

                   作者：王净净，黄云峰，刘春华 姚雪祥

【摘要】  目的 探讨眩晕定方对兔血管性眩晕气虚血瘀证模型血液流变学和脑血流图的影响。方法 建立实验性血管性眩晕气虚血瘀证家兔模型，以西比灵胶囊为阳性对照药进行比较，观察眩晕定方干预前后血液流变学和脑血流图等改变情况。结果 眩晕定方作用于气虚血瘀型血管性眩晕动物模型后，中剂量组全血黏度中切为2.56±0.15，高切为3.20±0.26；分别低于西比灵对照组的3.45±0.13、4.92±0.23；差异有显著统计学意义（P<0.01）；中剂量组脑血流图速率（V）为（0.009 2±0.002 4）?赘，高于西比灵组的（0.007 6±0.001 8）?赘，差异有显著统计学意义（P<0.01）。结论 眩晕定方可有效增加该模型兔的脑血流量，降低血液黏度。

【关键词】  眩晕定方；血管性眩晕；气虚血瘀；动物模型；兔；血液流变学；脑血流图

    〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ To investigate the effect of Xuanyunding(XYD), a formula of Chinese drugs for dizziness, on REG and blood rheology in vascular vertiginous model rabbit with the pattern of Qi deficiency and blood stasis(QDBS). Methods The vascular vertiginous model rabbits with QDBS were prepared, and compared with medicine sibelium, the effects of XYD on REG and blood rheology in these models were evaluated. Results The blood rheological scores in treatment group with middle dosage were respectively 2.56±0.15 and 3.20±0.26，while these in control group were respectively 3.45±0.13 and 4.92±0.23, the differences were significant(P<0.01) between them. The REG velocity score in treatment group with middle dosage were 0.0092±0.0024，while that in control group were 0.007 6±0.001 8, the differences were significant(P<0.01). Conclusion XYD is effective to increase blood volume and decrease blood viscosity in brain circulation.

    〔Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ〕 Xuanyunding; vascular vertigo; Qi deficiency and blood stasis; animal model; rabbits; blood rheology; REG

    眩晕是神经内科最常见的症状，也是常见的使病人最痛苦的症状，绝大多数人一生中经历过此症。据史玉泉教授报告国内人群眩晕患病率约为5‰，占神经内科门诊患者5%～10%，占住院患者的6.7%，占耳科门诊患者的7%[1]。眩晕是目前医学界所面临的一个很有挑战性的课题，已被列入“十一五”国家科技支撑计划。笔者通过多年临床经验的自拟方“眩晕定方”在临床应用中疗效满意[2]，因此对该方进行了深入的实验研究，以期探讨该方的作用机制，为进一步研发该方提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1  材料

    1.1.1  动物  健康日本大耳白兔70只（湖南中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：湘医动字D20-003号，环境合格证号：湘医动字D20-001号），雌雄各半，清洁级，体质量（2.0±0.3）kg，兔龄3～4月，室温18～20 ℃，湿度65%～70%，除正常组自由饮水进食外，其余家兔自由进水、控制进食＋高脂饲料喂养。

    1.1.2  药物与试剂  眩晕定方浓缩液：该浓缩液由黄芪，当归，党参，川芎，赤芍，地龙，葛根，丹参等组成。以上中药材购于湖南中医药大学杏林药号，浸泡，水煎2次，每次煎得200 mL，合并煎液，浓缩至125 mL，每毫升含生药1 g；西比灵胶囊：5 mg/粒，西安杨森制药有限公司生产，批号：20040203；消痔灵注射液：吉林集安制药集团，批号：20040416；硫化钠：上海昊化化工有限公司，批号：20031206。

    1.1.3  仪器  REG-IG2型血流图诊断仪（湖南益灵新技术有限公司），参数依据受试对象作相应调整设置；DV-Ⅲ锥板式血液黏度计（美国Brookfield公司）；“可调速动物眩晕产生仪”：用湘潭华成机电设备有限公司生产的YCT112-4A型调速电机改制（由湖南诚信机械加工厂协助完成），在其直流调速电机前加一个调速器，使旋转速度0～150 r/min自由可调，再在电机上连一个圆形金属盒放置家兔用，大小（直径×高）：35 cm×35 cm；“逃避刺激反射训练箱”：自制一大小为（长×宽×高）：70 cm×65 cm×65 cm的木笼子，底板为铁丝网，在笼内安装1个25 cm的高台，其面积为65 cm×30 cm大小，配套塑料球形刷1把作为疼痛刺激工具。

    1.1.4  高脂饲料  每100 g高脂饲料中含胆固醇1 g，蛋黄粉15 g，猪油5 g（由湖南中医药大学实验动物中心提供）。

    1.2  方法

    1.2.1  造模方法  选取清洁级健康成年日本大耳白兔70只，体质量（1.9±0.3）kg, 雌雄各半，随机抽取其中8只作为正常组，予以普通饲料80 g/（kg·d），每天分两次喂给，不作任何干预；其余62只采用饥饿＋高脂饲料＋旋转＋颈椎旁注射硬化剂复合方法造模，以跳台耗时、脑血流图为血管性眩晕评价指标，以行为、体质量、毛发、胸腺、肝脏的DNA含量为气虚评价指标，以舌苔、血液流变为血瘀评价指标。造模时间：先予以颈椎旁注射硬化剂（记为实验开始第1天），1周后重复1次，6周造模成功；予以高脂饲料10 g/（kg·d），时限1～6周；予以饥饿干预，即在高脂饲料干预之外，另给予普通饲料15 g/（kg·d）同时一次投予，时限1～6周；在第39～41天时进行逃避刺激反射训练，第42天旋转，测定旋转前后的跳台耗时。第42天对正常组和造模家兔全部复查体质量、脑血流图、血液流变学，得出结果后对家兔进行系统评分，按照预试造模成功率约为70％，约有40只家兔可望造模成功。

    1.2.2  动物分组及给药方法  在评估上述已造模动物后，将评分结果为阳性的家兔选出，每组按体质量由小到大编号，采用完全随机设计方法再分为模型组、西药对照组、XYDF低、中、高剂量组5组，雌雄各半。各组恢复正常喂养；西药对照组予以西比灵1.205 mg/（kg·d）溶于35 mL蒸馏水中灌胃；低、中、高剂量分别予以眩晕定方浓缩液4.45、8.91、17.82 mL/（kg·d）灌胃，灌胃药液总量不足35 mL者加蒸馏水配齐，1 d 1次，时限为第46～56天。第57天起停止灌胃并休息5 d，第61天再测体质量、脑血流图、血液流变及旋转前与后跳台耗时。比较干预前后脑血流图、血液流变学的改变情况。

    1.2.3  脑血流图的描记与分析方法  采用REG－IG2型血流图自动分析诊断仪（由湖南益灵新技术有限公司据预试结果已对参数作相应调整设置），在造模前后各测定脑血流图1次，比较硬化剂注射侧（左侧）椎－基底动脉系统前后脑血流图各指标的变化。方法：硫化钠脱毛后第3天在安静清醒状态下测量家兔脑血流图，先把家兔俯卧固定在固定架上，采用枕-乳突导联，然后将改良后的矩形电极放置在前额正中、左右乳突和枕后，主振频率90 kHz，二电极法，定标Z=0.1Ω，记录家兔脑血流图，由机采样作拐点分析（包括二阶导数），计算波幅、面积（S）、速率（V）、阻力指数（F1）、弹力指数（Z1）等参数的变化[3]7-9。

    1.2.4  血液流变学指标的测定及分析方法  动物空腹禁食、禁水8 h后，抽取耳缘静脉血2 mL（加1.25万u/mL肝素0.2 mL），经循环水浴（37 ℃），通过DV-Ⅲ锥板式血液黏度计测定全血粘度，每次样本量为0.5 mL，每个样本测量3次，取其均值，黏度计转速范围为100 s-1（低切）、1 000 s-1（高切），测得数据由机自动记录[Rheocalc32软件（Brookfield公司）]。

    1.3  统计学分析

    计量资料以“平均值±标准差”（ｘ±ｓ）表示；多组样本均数间比较采用方差分析；两两比较用Q检验；使用SPSS13.0统计软件。

    2 结果

    2.1  血液流变学改变比较

    全血黏度分高切变和低切变，高切变黏度反映红细胞的变形能力，红细胞变形能力低的血液，其高切变黏度就高；低切变黏度反映红细胞的聚集能力，红细胞相互聚集的血液，其低切变黏度增高。本实验取外周静脉血作全血黏度比较，见表1。

    表1资料经统计学处理表明：模型组与正常组比较差异有显著统计学意义（P<0.01），提示模型组血黏度明显高于正常组；西比灵组与模型组比较差异无统计学意义（P>0.05），提示西比灵无降低血黏度作用；眩晕定方中、高剂量组与正常组比较差异无统计学意义（P>0.05），提示眩晕定方中、高剂量干预模型家兔后血黏度基本恢复至正常水平。

    2.2  脑血流图比较

    脑血流图的主要观察指标有：波幅、面积、速率、阻力指数Z1、弹力指数F1等，其中速率＝面积/时间，反映血流速度变化快慢，是指某一时刻流入的血流量，是最为集中反映脑血流量的有效指标。结果见表2、图1～2。

    表2资料经统计学处理表明：模型组与正常组比较差异有显著统计学意义（P<0.01），提示模型组脑血流图速率明显低于正常组，脑血流图速率这一指标可以衡量造模是否成功。眩晕定方高、中剂量组与西比灵组比较差异有统计学意义（P<0.05和P<0.01），提示眩晕定方低、中剂量组增加脑血流图速率作用优于西比灵组；西比灵、眩晕定方药物干预组与正常组比较差异无统计学意义（P>0.05），提示各药物干预模型家兔后基本恢复至正常水平。

    3 讨论

    血管性眩晕是指由于前庭系统的血液灌注不足而导致前庭系统功能障碍, 使患者感到眩晕。前庭系统血液灌注不足主要取决于椎-基底动脉系统的血管状态、血液成分及血流灌注压[4]。对于血管性眩晕的发病机制当前认识如下[5-8]。

    由于动脉粥样硬化、血液黏稠度增高、血压偏低等原因导致内听动脉或其他动脉血栓形成或短暂性脑缺血发作，进而导致脑干缺血和内耳缺血缺氧，血管壁渗透性增高，膜迷路积水，从而使神经元代谢受损，包括氧化损伤和钙稳态失衡，突触效能下降，眩晕出现，若缺血反复发作或长期存在致前庭器官及神经退行性变；此外，由于旋转致自主神经调节障碍，内听动脉痉挛引发内耳缺血缺氧也是血管性眩晕的发病机制之一。

    在目前几种用于测量脑血流量的方法中，脑血流图是一种无创性的反映搏动性脑供血情况、估计脑血管的充盈状况、脑血管调节机能和血管弹性的检查方法，正是由于其无创性，利于实验动物多次检测。另一方面，脑血流图是一种较好的定量评定指标，可客观有效地评价家兔眩晕实验中椎动脉血流变化情况，从而间接的评价眩晕的有无。脑血流图的基本特征是随心动周期而变化的周期性，分析指标的核心是周期性曲线上各拐点的变化以及各拐点之间的相关性。脑血流图分析的依据是血液流体动力学原理，分析的重点是流入与流出关系[3]7-9。脑血流图上波形曲线上的拐点，可通过二阶微分函数识别，为脑血流图分析客观化、数量化、标准化和自动化解决了关键技术[9]。脑血流图的观察指标有：波幅、面积、速率、阻力指数Z1、弹力指数F1等，其中速率＝面积/时间，反映血流速度变化快慢，是指某一时刻流入的血流量，是最为集中反映脑血流量的有效指标。模型组速率较造模前及正常组、药物干预组明显降低，显示脑血流量减少，可能是椎动脉局部狭窄、动脉弹性降低、血液黏稠度增高的结果，而药物干预后脑血流图速率较模型组高，可能是眩晕定方扩张微血管、降低血黏度的结果。

    血液流变学与中医血瘀的关系密切，血流流变学指标反映血液的黏滞性、浓稠性、聚集性和凝固性，是血瘀证病理变化的重要参数。全血黏度主要由红细胞和变性能力所决定，家兔的红细胞与人相同，均为无核红细胞，其聚集性与人相对接近，当血液黏滞度增高、显著的高黏状态，这势必影响微循环的灌注；全血黏度增高则血液流动性差，最终导致微循环障碍。在灌注压和血管口径不变的情况下，脑血流量与血液粘滞度成反比，即血液黏滞度升高时脑血流量降低[10]。本研究采用锥板粘度计方法，在不同切变率下进行检测，较全面地反映了不同切变率下的全血黏度变化。与正常组比较，造模后模型组低、高切变率明显增高，说明本法造模可增加家兔血液的黏滞性；眩晕定方对低、高切变率(特别是高切)下的全血黏度有显著降低作用，从一个侧面证明了该方确有化瘀作用。

    根据本研究结果，眩晕定方可有效增加该模型家兔的脑血流量，降低血黏度。

【】
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