反相高效液相色谱法测定康溃丸中芍药苷含量

【摘要】  目的 建立高效液相色谱法测定康溃丸中芍药苷含量的方法。方法 色谱柱：Ultimate XB-C18柱（5μm,4.6nm×250mm）；流速为1.0ml/min；柱温：30℃；流动相：乙腈－0.05％磷酸二氢钾溶液（14：86）；检测波长230nm；进样量：10μl。结果 芍药苷在浓度为40.08～320.64μg/ml时线性关系良好，r=0.9999，平均回收率为100.29％；RSD为1.3％（n=6）。结论 该方法简单、准确，可作为康溃丸的质量控制。

【关键词】  高效液相色谱法；康溃丸；芍药苷

    【Abstract】  Objective  To establish a HPLC method for determination of Paeoniflorin in Kangkui pills.Methods  Column: Ultimate XB-C18（5μm,4.6nm×250mm）；flow rate was 1.0ml/min；the column temperature was 30℃；the mobile phase  consisted of acetonitrile－0.05％potassium dihydrogen phosphate（14：86）；and the detectionwavelength was 230nm.Results  The linear ranges of Paeoniflorin was at 40.08～320.64μg/ml （r=0.9999）.The average recovery was 100.29%（RSD=1.3％,n=6）.Conclusion  The method is simple and accurate. It can be used for quality control of Kangkui pills.

    【Key words】  RP-HPLC；Kangkui pills；paeoniflorin

    康溃丸是连云港市中的医院制剂，由黄芪、当归、赤芍、白芍、甘草、菊花等多味药组成，具有益气养血、滋阴降火、清热解毒、活血止痛生肌的功能，用于复发性口腔溃疡。该制剂现无含量测定方法，为完善标准，控制其产品质量，采用反相高效液相色谱法对制剂中的芍药苷进行定量分析，建立了可靠、准确的质量控制方法。

　　1  仪器与试药

    Agilent 1200高效液相色谱仪；芍药苷对照品（药品生物制品检定所提供，批号110736-200527）；康溃丸（连云港市中医院制剂室，批号：20070613，20070702，20070509；规格：每瓶装50g），乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

    2.1  色谱条件  色谱柱：Ultimate XB-C18柱（5μm,4.6nm×250mm）；流速为1.0ml/min；柱温：30℃；流动相：乙腈－0.05％磷酸二氢钾溶液（14：86）；检测波长：230nm；进样量：10μl。

    2.2  对照品溶液制备  精密称取芍药苷对照品20.04mg，置50ml容量瓶中，用稀乙醇溶解并定容至刻度，制成400.8μg/ml的贮备液。分别精密量取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0ml，各置10ml量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，分别制成40.08、80.16、160.32、240.48、320.64μg/ml的溶液，即得。

    2.3  供试品溶液制备  称取康溃丸粉末（过六号筛）约0.6g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率400W，频率80kHz）45min，通过0.45μm的微孔滤膜，滤取续滤液为供试品溶液。

    2.4  线性范围  分别精密量取“2.2”项下的芍药苷对照品溶液各10μl注入高效液相色谱仪进行测定，测量峰面积比。以对照品浓度（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，经线性回归。结果表明：芍药苷在40.08～320.64μg/ml范围内与峰面积线性关系良好。其回归方程为：Y=24.33+11.80X，r=0.9999。

    2.5  干扰试验  将除赤芍和白芍的其他几味药材按处方所述方法制成阴性供试品，照“2.3”项下操作，制成阴性供试品液。在相同色谱条件下进样。色谱图见图1。

    2.6  精密度试验  精密量取上述对照品溶液（80.16μg/ml）10μl ，连续进样6次，记录峰面积，结果峰面积RSD=1.2%（n=6）。

    2.7  稳定性试验  精密吸取同一样品溶液10μl，分别在0、3、6、9、12、18、24h进样，结果24h内峰面积RSD=0.9%（n=7）。结果表明，供试液待测组分在24h内稳定。   图1  康溃丸的色谱图

    A.对照品  B. 供试品  C.不含赤白芍的阴性对照

    2.8  重复性试验  取同一批号样品6份，测定含量，结果表明，本方法重复性良好，芍药苷含量RSD=1.2％（n=6）。

    2.9  加样回收率试验  取同批号样品6份，每份0.6g，分别加入芍药苷对照品适量，按2.3项操作，进样，测得回收率，结果见表1。表1  芍药苷加样回收率试验结果 （略）

    2.10  样品测定  按2.4项下条件，分别测定3批康溃丸样品含量，结果见表2。表2  样品含量测定 （略）

    3  讨论

    本方法采用高效液相色谱法测定样品中芍药苷的含量，方法简单、可靠，可作为康溃丸的质控指标之一。报道方法［1］，进行了样品提取溶剂、提取方法和提取次数等因素的考察，结果表明以稀乙醇为溶剂，采用超声处理，效果较好，供试品中的芍药苷即可提取完全。

【参考文献】
  1 国家药典委员会.药典，一部..北京：化学出版社，2005，534.