改进菊花中绿原酸含量的测定方法

【关键词】  菊花；,,高效液相色谱；,,绿原酸
　　摘要：目的对菊花中绿原酸含量的测定方法进行改进。方法采用高效液相色谱（HPLC）法测定绿原酸含量。结果菊花中绿原酸的含量按《药典》2005年版Ⅰ部方法实验，样品提取方法复杂，含量有损失，误差较大。结论 将含量测定方法改进后，具有样品溶液提取方法简便、含量准确可靠、分离效果好、灵敏度高、稳定性好等优点，为标准的修订提供可行的依据。
　　关键词：菊花；  高效液相色谱；  绿原酸   
　　菊花为菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头状花序。药材按产地和加工方法不同，分为“亳菊”“滁菊”“贡菊”“杭菊”。本文分别对亳菊和杭菊进行了含量分析，改进后的方法（第2法）具有样品溶液提取方法简便、含量准确可靠等优特点。
　　1  器材
　　氯仿、磷酸均为分析纯；甲醇、乙腈均为色谱纯；Agilent 1100 HPLC化学工作站；Mettler AE240天平；样品由湖北省宜昌市众生医药公司和湖北省红安县中医提供，经宜昌市药品检验所鉴定为“杭菊”，湖北某提供的菊花经鉴定为“亳菊”；绿原酸对照品（由中检所提供，供含量测定用，批号为110753200212）。
　　2  方法与结果
　　2.1   第1法按《中国药典》2005年版Ⅰ部方法实验。
　　2.1.1  色谱分析条件色谱柱为Nucleosil C18(10 μm,4.6 mm×250 mm)；柱温25℃；流动相：0.1 mol/L磷酸二氢钠缓冲液［取磷酸二氢钠（NaH2PO4・2H2O）15.6 g，加水至1 000 ml，制成0.1 mol/L的溶液，加入磷酸适量，使pH值为2.7］甲醇（70∶30）；检测波长328 nm；进样量20 μl；流速1.0 ml/min；AUFS=0.12s。
　　2.1.2  对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加水制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得（10℃以下保存）。
　　2.1.3  供试品溶液的制备  取样品粉末（过1号筛）约1 g［同时另取样品粉末测定水分（附录Ⅸ H第1法）］，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，加热回流2 h，冷却，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，蒸干，残渣加氯仿5 ml，浸渍3 min，弃去氯仿液，残渣挥去氯仿，加水适量使溶解，并转移至5 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得（应于当日测定）。
　　2.2  第2法（改进后的方法）
　　2.2.1  色谱分析条件 流动相：乙腈0.4%磷酸溶液（12∶88），其余同第1法。
　　2.2.2  对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得（10℃以下保存）。
　　2.2.3  供试品溶液的制备 取样品粉末约0.5 g［同时另取样品粉末测定水分（附录Ⅸ H第1法）］，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，置25 ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。
　　2.3  系统适应性实验
　　2.3.1  第1法按《中国药典》2005年版Ⅰ部方法实验。理论板数：本文依法对样品和对照品进行了处理，并按上述条件进行色谱测定，其理论板数为 4 495，符合《中国药典》规定。重复性实验：取新配制的绿原酸对照品溶液，进样5次，所得峰面积积分值为 5 753，5 748，5 747，5 750，5 747，RSD= 0.04% (n=5)。2.3.2  第2法（改进后的方法）理论板数：本文依法对样品和对照品进行了处理，并按上述条件进行色谱测定，其理论板数为 5 241，符合药典规定。重复性实验：取新配制的绿原酸对照品溶液，进样5次，所得峰面积积分值为5 908，5 891，5 893，5 889，5 885，RSD=0.15%(n=5)。
　　2.4  样品测定结果
　　2.4.1  第1法将样品依法处理。结果见表1。
　　表1  3批菊花样品的测定结果(略)
　　2.4.2  第2法（改进后的方法）将样品依法处理。结果见表2。
　　表2  3批菊花样品的测定结果(略)
　　2.5  回收率实验(第2法)   精密称取众生药业提供的菊花样品约0.5 g，定量加入适量的绿原酸对照品，下同供试品项下操作，在上述色谱条件下测定，测得平均回收率为99.9%。结果见表3。
　　表3   绿原酸回收率实验结果(略)
　　3  讨论
　　3.1  菊花按《药典》的方法测定绿原酸的含量，样品溶液的提取比较复杂，含量损失大，特别是从蒸发皿中用水洗涤定容至5 ml量瓶中，误差大， 测出的含量要比实际的含量低。
　　3.2  菊花按《中国药典》的方法测定绿原酸的含量，其色谱条件不是很理想，流动相的比例要改为80∶20，效果会更好，特别对质量很差的菊花更要注意。本实验的样品由于湖北某贮存时间太长，严重褪色，含量很低。若不改动流动相的比例，则色谱图的分离效果很差。
　　3.3   改进后的方法中样品溶液的制备方法简便、损失量少、使得测定的结果更加准确可靠，测出的含量要比第1法高，为标准的修订提供可行的依据。