电针丰隆穴对高脂血症大鼠一氧化氮和内皮素的影响

                            作者：周利, 张红星, 刘灵光, 万文俊

【摘要】  探讨电针（electro-acupuncture, EA）丰隆穴对高脂血症（hyperlipidemia, HLP）大鼠血脂、一氧化氮（nitric oxide, NO）及内皮素（endothelin, ET）含量的影响。方法：将80只Wistar大鼠随机分为4组：正常对照组（饲喂基础饲料）、模型组（饲喂高脂饲料）、电针组（饲喂高脂饲料+电针丰隆治疗）、普伐他汀治疗组（饲喂高脂饲料+普伐他汀钠灌胃）。各组20只。30 d后称取各组大鼠体质量，以改良大鼠心脏穿刺采血方法采血，检测血脂、NO以及ET含量。 结果：与正常对照组比较，模型组大鼠体质量、总胆固醇（total cholesterol, TC）、甘油三酯（triacylglycerol, TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein-cholesterol, LDL-C）和ET水平显著升高（P＜0.05，P＜0.01）；高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein-cholesterol, HDL-C）、NO水平显著降低（P＜0.05）。与模型组比较，普伐他汀治疗组、电针治疗组大鼠体质量、TC、TG、LDL-C水平明显降低（P＜0.01），NO水平显著升高。普伐他汀治疗组HDL-C水平显著升高，而电针治疗组升高不明显，两组之间差异有统计学意义（P＜0.01）。普伐他汀治疗组ET水平降低（P＜0.05），电针治疗组ET水平降低不明显（P＞0.05）。结论：电针治疗和西药治疗均对HLP大鼠血脂具有良性调节作用，且能在一定程度上纠正高脂状态下NO和ET水平的失衡。西药对HLP大鼠HDL-C有较好的良性调节作用，而电针对HLP大鼠HDL-C的调节作用有限。

【关键词】  高脂血症; 电针疗法; 丰隆; 一氧化氮; 内皮素

     Objective: To investigate the effect of electro-acupuncture (EA) at Fenglong (GV 16) on body weight, blood lipids, nitric oxide (NO) and endothelin (ET) in rats with hyperlipidemia (HLP).

    Methods: Eighty Wistar rats were randomly divided into normal control group (fed normal diet), untreated group (fed a high-fat diet), EA-treated group (fed a high-fat diet plus EA therapy) and pravastatin-treated group (fed a high-fat diet plus pravastatin tablet). There were 20 rats in each group. The body weight and the blood content of total cholesterol (TC), triacylglycerol (TG), high density lipoprotein-cholesterol (HDL-C), low density lipoprotein-cholesterol (LDL-C), NO the and ET of the rats in different groups were measured before experiment and after 30-day treatment. A modified method of cardiac puncture for blood sampling was used for blood collection.

    Results: Compared with the normal control group, the body weight and the levels of TC, TG, LDL-C and ET in the untreated group were significantly elevated (P＜0.01, P＜0.05), while the levels of HDL-C and NO were obviously decreased (P＜0.05). The body weight and the levels of TC, TG, LDL-C demonstrated significant reduction in pravastatin-treated group and EA-treated group as compared with the untreated group (P＜0.01), and the NO content in pravastatin-treated group and EA-treated group was higher than that in the untreated group (P＜0.01). Compared with the untreated group, HDL-C level was elevated significantly in pravastatin-treated group, while HDL-C level in EA-treated group was not changed significantly, and there was significant difference in the HDL-C level between pravastatin-treated group and EA-treated group (P＜0.01). The level of ET was decreased obviously in pravastatin-treated group (P＜0.05), while the level of ET in EA-treated group was not changed significantly (P＞0.05).

    Conclusions: Both EA therapy and pravastatin have efficient regulation of body weight and the content of TC, TG, LDL-C and NO in HLP rats. To some extent, they are able to regulate the imbalance between ET and NO content under the condition of HLP. Western medicine such as pravastatin can regulate the HDL-C level in HLP rats, while the effect of EA therapy on regulation of the HDL-C level is limited.

    Keywords: hyperlipidemia; electro-acupuncture; Fenglong; nitric oxide; endothelin

    高脂血症（hyperlipidemia, HLP）是指血液中一种或多种脂质含量超过正常高限的疾病。中医学对于“HLP”的认识源于《内经》的“膏脂学说”，认为其属于血脉中的病变，为血中之痰浊，由血脉不畅、气滞血瘀和痰阻脉络等经络气血的运行失常所致。医学认为HLP能够引起内皮细胞损伤及血管收缩、舒张功能异常，是导致动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）发生的决定因素［1］。HLP与致AS相关因素一氧化氮（nitric oxide, NO）、内皮素（endothelin, ET）之间存在密切关系。本课题在前期大样本、多中心临床研究的基础上［2］，进一步观察电针丰隆穴对HLP大鼠血脂的调节作用，从而为其临床疗效提供实验依据。

    1  材料与方法

    1.1  材料

    1.1.1  动物  160～180 g SPF级健康成年雄性Wistar大鼠80只，由湖北省实验动物研究中心提供，实验动物质量合格证号：SYXK（鄂）2003-0014。

    1.1.2  药品与试剂  普伐他汀钠片，中美上海施贵宝制药有限公司，批准文号为（95）卫药准字J-19；胆固醇，上海试一化学试剂有限公司，批号为040803；猪胆盐，成都科龙化工试剂厂，批号为050511；基础饲料和蛋黄粉由湖北省实验动物研究中心提供；猪油（自制）；ET试剂盒，北京科美东雅生物技术有限公司，批号为20061125；NO试剂盒，南京建成生物工程研究所第一分所。

    1.1.3  仪器  LH202H型韩氏穴位神经刺激仪（北京华卫产业开发公司）；Jouan B4i型高速离心机（法国Jouan Industries S.A.S.公司）；Olympus AU2700型全自动生化分析仪（日本Olympus公司）；DFM-96型多管放射免疫计数器（合肥众成机电技术公司）；－20℃冰箱（海尔冰箱BCD-259K/A）。

    1.2  动物及分组  将80只Wistar大鼠随机分为4组：正常对照组（饲喂普通饲料），模型组（饲喂高脂饲料），电针治疗组（饲喂高脂饲料+电针丰隆穴），普伐他汀治疗组（饲喂高脂饲料+普伐他汀钠灌胃）。每组20只。实验中有5只大鼠死亡，其中电针治疗组3只，普伐他汀治疗组2只。

    1.3  造模方法  正常对照组予基础饲料，其他3组基础饲料适应性喂养1周后改喂高脂饲料，饲料配方中华人民共和国卫生部《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）辅助降血脂功能检验方法：基础饲料78.8％、猪油10％、胆固醇1％、猪胆盐0.2％、蛋黄粉10％，自由喂养，连续喂养30 d。

    1.4  方法

    1.4.1  电针治疗组  取穴定位参照华兴邦介绍的大鼠穴位图谱［3］及拟人比照法取双侧“丰隆”穴，选用30号1寸“瑞琪尔”（NATURAL）牌一次性无菌针灸针（中美合资姑苏针灸器械有限公司），以直角快速刺入，进针0.5寸，接LH202H型韩氏穴位神经刺激仪，等幅疏密波，电流强度2 mA，频率2/100 Hz，留针30 min，1次/d，连续治疗30 d。

    1.4.2  普伐他汀治疗组  将普伐他汀钠片溶于蒸馏水中配成1.25 mg/ml悬浊液，［4］按20 mg/(kg·d)的剂量灌胃，1次/d，连续治疗30 d。

    1.5  指标检测方法  大鼠麻醉后，采用改良大鼠心脏穿刺采血方法，分别用肝素钠试管和加入EDTA·Na2 30 μl、4万U/ml抑肽酶40 μl试管各采血2～3 ml。4 ℃离心10 min（3 000 r/min），取离心后的上层血浆放入2支1.0 ml环氧树脂管（EP管）内，－20℃冰箱保存。采用全自动生化分析仪，测定血浆中总胆固醇（total cholesterol, TC）、甘油三酯（triglyceride, TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C）含量；ET含量采用放射免疫分析法测定，NO含量采用硝酸还原酶法检测，严格按试剂盒说明书进行。

    1.6  统计学方法  实验数据用x±s表示，用SPSS 14.0统计软件中的方差分析（ANOVA）进行数据处理。

    2  结  果

    2.1  各组大鼠体质量  与正常对照组比较，模型组大鼠体质量明显增加（P＜0.01）；与模型组比较，电针治疗组、普伐他汀治疗组大鼠体质量均明显减轻（P＜0.01），但电针治疗组与普伐他汀治疗组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

    2.2  各组大鼠血脂含量  与正常对照组比较，模型组大鼠TC、TG、LDL-C水平显著升高（P＜0.01），HDL-C水平显著降低（P＜0.05）。与模型组比较，电针治疗组和普伐他汀治疗组TC、TG、LDL-C水平均显著降低（P＜0.01），电针治疗组和普伐他汀治疗组之间TC、TG、LDL-C水平差异无统计学意义。与模型组比较，普伐他汀治疗组HDL-C水平显著升高（P＜0.01），而电针治疗组HDL-C水平升高不明显（P＞0.05），普伐他汀升高HDL-C水平的疗效优于电针治疗组（P＜0.01）。见表2。

    2.3  各组大鼠血浆ET和NO含量  与正常对照组比较，模型组NO水平明显降低（P＜0.05），ET水平明显升高（P＜0.05）；与模型组比较，电针治疗组、普伐他汀治疗组NO水平均显著升高（P＜0.01），并且普伐他汀治疗组ET水平降低（P＜0.05），而电针治疗组ET水平降低不明显（P＞0.05）。电针治疗组和普伐他汀治疗组在调节NO、ET方面的差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。 表1  各组大鼠体质量（略）表2  各组大鼠TC、TG、HDL-C及LDL-C含量（略）表3  各组大鼠血浆ET、NO含量（略）

    3  讨  论

    血管舒缩运动主要是通过血管内皮细胞分泌的ET、NO等血管活性因子来实现［4］。ET是目前发现的最强的内源性缩血管活性多肽［5］。血管内皮细胞主要分泌ET-1。在HLP状态下存在ET产生通路的活跃，ET-1可明显促进血管平滑肌细胞的分裂增殖，活化巨噬细胞，引起内皮进一步损伤，因此有效降低过高的ET-1含量可以减轻HLP状态对机体的损伤［6］。NO是血管内皮细胞分泌的舒血管活性物质，除能舒张血管，抑制血管平滑肌增殖外，还有抗氧化损伤、抗血小板聚集和抑制单核-巨噬细胞浸润等作用［7］。内源性NO生成减少导致内皮依赖性血管舒张功能受损是HLP引起的血管病变和AS的早期特征［8］。内皮功能障碍在适当的治疗下是可逆的，NO是一种理想的抗AS因子，提高NO浓度可改善血管内皮功能［9］。

    正常状态下，内皮细胞合成释放的ET和NO处于动态平衡中。HLP特别是高LDL-C血症对内皮细胞有毒性作用［10］，可使动脉内皮细胞受损，NO的生成和释放受到抑制；同时LDL-C被氧化成氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein, OxLDL），OxLDL是造成内皮系统损害的主要物质［11］，可诱导内皮细胞表达前ET原的mRNA，促进ET的合成和释放，导致NO和ET平衡被破坏。

    本研究结果表明电针丰隆和普伐他汀均可显著降低TC、TG、LDL-C水平，同时可显著升高NO水平（P＜0.01），并在一定程度上降低ET水平。电针丰隆和西药治疗在良性调节血脂的同时，均可以在一定范围内纠正高脂状态下NO和ET的失衡，从而改善高脂状态下血管舒缩功能的障碍。因此，我们在临床治疗HLP的同时，应兼顾血管活性物质的使用。

    “血脂”与古文中的“膏脂”相类似，属津液之范畴，并可与津液其他成分相互转化。一旦膏脂在体内的转输、排泄发生异常，则成为病理性的脂浊痰湿。脂浊注入血脉，积蓄停留，即可引发“HLP”。其发病的根本在于脾“运”和“化”的功能不足。中医学认为丰隆穴是足阳明胃经之络穴，为祛痰要穴，具有调理脾胃之功效。电针丰隆穴可通过和胃健脾、化痰利湿、促进水谷精微的运化而达到调节血脂的作用。

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