峨眉产味连指纹图谱研究
作者：蒋合众，马超英，刘军，林琳，吴晓青
【关键词】 峨眉产味连；指纹图谱；高效液相色谱法
Abstract：ObjectiveTo establish a sensitive and specific HPLC method for the quality control of Emei's Coptis chinensis Franch.MethodsThe chromatographic fingerprint of Emei's Coptis chinensis Franch was obtained by RP-HPLC(DAD) and the gradient elution mode was applied in chromatographic separation,data was analyzed by Fingerprint Similarity Evaluation Software to compare the similarity of samples.ResultsThe HPLC fingerprint of Emei's Coptis chinensis Franch was established preliminarily,showing 9 characteristic peaks,by comparision of the retention time of chemical standards,peak 6,8 and 9 were identified as Jatrorrhizine, Palmatine and Berberine.ConclusionThe HPLC fingerprint method is repeatable and can be used for quality control of Emei's Coptis chinensis Franch.
Key words： Emei's Coptis chinensis Franch； Fingerprint； HPLC
峨眉产味连为四川著名道地药材，来源于毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch（习称“味连”）的根茎，秋季采挖，除去须根及泥沙，干燥，去除残留须根［1］。味苦、性寒，入心、肝、胃、大肠经，具有清热燥湿、泻火解毒的功能，是一种临床应用广泛的清热燥湿解毒药，常用于湿热痞满、呕吐、泻痢、黄疸、高热神昏、心火亢盛、牙痛、消渴及痈肿疔疮；外治湿疹、湿疮、耳道流脓、中耳炎等肿疡类疾病［2～4］。味连根茎的主要成分为药根碱(jatrorrhizine)、黄连碱(coptisine)、巴马汀(palmatine)、小檗碱(berberine)、伪小檗碱(epiberberine)等季胺型生物碱［5］。其中小檗碱含量最高，约5%～8%，一般用这些生物碱在生药中的含量来评价黄连的质量，但单一成分难以反映黄连的整体特征，建立简便可行的指纹图谱方法是目前更好评价黄连质量的有效方法，也是中药标准化的一项重要内容。目前色谱指纹图谱技术已成为中药质量控制最佳的方法之一。本研究采用反相高效液相色谱法，对四川峨眉产味连GAP基地主要产地（四川峨眉山市龙池镇）的样品进行研究，制定出峨眉产味连的指纹图谱。
1 仪器与试药
1.1 仪器岛津高效液相色谱仪，二极管阵列检测器，CLASS-VP色谱工作站；色谱柱：Waters RP18（4.6 mm×250 mm）。
1.2 试剂乙腈、甲醇为色谱纯（天津科密欧公司），水为超纯水（实验室自制），其他试剂为分析纯。
1.3 对照品盐酸小檗碱（批号110713-200208，供含量测定用）、盐酸巴马汀（批号0732-200005，供鉴别用）和盐酸药根碱对照品（批号0733-200005，供鉴别用）均由药品生物制品检定所提供。
1.4 样品
味连根茎，生长年限为4年，采集时间2004-12，采集地点为峨眉龙池，经西南大学药学院宋良科副教授鉴定为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch（味连），经低温干燥，粉碎，过60目筛备用。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
岛津高效液相色谱仪，二极管阵列检测器；色谱柱：Waters RP18（4.6 mm×250 mm）；流动相：乙腈-磷酸二氢钾溶液（0.033 mol/L，磷酸调pH=2.6）为流动相梯度洗脱，流速1.0 ml/min，梯度洗脱条件见表1；检测波长268 nm；柱温30℃；进样量：供试品和对照品各10 μl。表1 味连指纹图谱流动相梯度洗脱条件（略）
2.2 对照品溶液的制备
分别精密称取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱对照品各约0.001 g，加甲醇溶解并定容至10 ml，制成浓度为0.1 mg/ml的标准混合溶液，待用。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取峨眉产味连样品粉末约0.1 g，用甲醇（含1%盐酸）溶解味连样品并定溶于25 ml容量瓶中，于60℃加热15 min，超声萃取30 min，静置过夜，用甲醇补足减少的溶液至刻度，用0.45 μm微孔滤膜过滤，待用。
2.4 方法学考察
2.4.1 样品稳定性考察
取同一份峨眉产味连供试品溶液分别在0，1，2，4，8，12，24，48 h不同时间点进行检测，用相似度软件（药品生物制品检定所中药室提供的《中药色谱图分析和数据管理系统》）考察特征色谱峰的相似度，结果相似度＞0.905 935，表明味连样品供试品溶液在48 h内稳定。
2.4.2 仪器精密度考察
取同一份峨眉产味连供试品溶液连续进样5次，考察特征色谱峰的相似度，结果相似度＞0.927 432，表明仪器精密度良好。
2.4.3 重复性实验
取同一批峨眉产味连样品，按“2.3”项下供试品制备方法分别制备5份供试品，同法检测，考察特征色谱峰的相似度，结果相似度＞0.977 846，表明本法测定的重复性良好。
2.5 指纹图谱的建立
精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，分别按“2.1”项下色谱条件测定。经过详细分析比较多批次味连样品的色谱图所给出的峰数、峰面积和相对保留时间等相关参数，确定9个特征峰构成峨眉产味连的指纹图谱，为方便分析，将整个色谱图谱分成Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ3组。第Ⅰ组包括1～3号峰（保留时间范围3～30 min），其中1号峰为溶剂峰；第Ⅱ组包括4～7号峰（保留时间30～38 min）；第Ⅲ组包括8～9号峰（保留时间38～43 min）。各特征峰峰号及保留时间见表2，代表性指纹图谱见图1。表2 特征峰峰号及保留时间（略）
3 讨论
建立简便有效的质量控制方法是中药标准化的重要内容，也是中知药走向世界的重要课题，本实验采用RP-HPLC法建立了峨眉产味连的指纹图谱，方法简便重复性好，能完全分离黄连中的6个主要生物碱成分可用于峨眉味连的质量评价。
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［1］国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学出版社，2005：213.
［2］徐锦堂，王立群，徐蓓.黄连研究进展［J］.中国医学院学报，2004,26 (6):704.
［3］田智勇，李振国．黄连的研究新进展［J］.时珍国医国药，2004，15（10）：704.
［4］中华人民共和国卫生部药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］.北京：人民卫生出版社，1990：275.
［5］黄小平，李隆云，瞿显有，等．石柱黄连指纹图谱研究［J］.中药材，2006，29(7)：666．
