青霉素V钾片人体生物等效性研究

            作者：徐富培，周远大，何海霞，杨辉

【关键词】  青霉素V钾片；高效液相色谱法；生物等效性

　　［摘要］ 目的：研究重庆科瑞制药有限公司生产的青霉素V钾片（以下称试验药）的人体生物等效性。方法：20名健康男性志愿者随机分为A、B两组，每组10人，采用随机交叉试验设计，单剂量口服青霉素V钾片试验药或对照药750 mg，高效液相色谱法测定血清中药物浓度，3P97机软件计算药动学参数。结果：试验药和对照药的Cmax分别为（10.23±4.81）μg/mL和（10.05±4.49）μg/mL；Tmax分别为（0.44±0.16）h和（0.54±0.13）h；t1/2(β)分别为（0.59±0.4）h和（0.51±0.28）h；AUC(0～∞)分别为（9.15±3.34）μg/(h・mL)和（9.71±4.04）μg/(h・mL)；AUC(0～T)分别为(8.97±3.43) μg/(h・mL)和(9.54±3.96) μg/(h・mL)。试验药的人体相对生物利用度为（94.02±16.31）%。结论：青霉素V钾片试验药与市售药比较具有生物等效性。

　　［关键词］ 青霉素V钾片；高效液相色谱法；生物等效性

　　Bioequivalence of phenoxymethylpenicillin potassium tablets in healthy male volunteers

　　［Abstract］ Objective:To study the bioequivalence of phenoxymethylpenicillin potassium tablets. Methods: A single oral dose of 750 mg phenoxymethylpenicillin potassium tablet was given to 20 healthy male volunteers in an open randomized crossover test. The plasma levels of phenoxymethylpenicillin potassium were determined by HPLC with ultraviolet detection. Results: The pharmacokinetic parameters of tested and phenoxymethylpenicillin potassium tablets were as follows, Cmax was (10.23±4.81)μg/mL and (10.05±4.49)μg/mL; Tmax was (0.44±0.16)h and (0.54±0.13)h; t1/2(β) was (0.59±0.4)h and (0.51±0.28)h; AUC(0～∞) was (9.15±3.34)μg/(h・mL) and (9.71±4.04)μg/(h・mL); AUC(0～T) was (8.97±3.43)μg/(h・mL) and (9.54±3.96) μg/(h・mL). The relative bioavailability of phenoxymethylpenicillin potassium tablet was (94.02±16.31)%. Conclusions: This study shows that the two kinds of preparations are bioequivalent.

　　［Key words］ Phenoxymethylpenicillin potassium; HPLC; Bioequivalence
   
　　青霉素V具有耐酸的特性，克服了青霉素只能通过注射发挥全身或局部作用的不便和缺点［1］，其钾盐已制成多种制剂供口服，大大方便了患者使用，增加了患者使用青霉素的顺应性。笔者对20名健康男性志愿者采用双制剂、两周期、双交叉试验设计，用高效液相色谱法测定血清中的青霉素V钾浓度，进行人体相对生物利用度研究，以评价口服重庆科瑞制药有限公司研制的青霉素V钾片的生物等效性。

　　1  材料与方法

　　1.1  仪器、药品与试剂日本岛津高效液相色谱仪，LC10AT泵系统，SPD10A型可调波长紫外检测器和CR7Ae plus积分仪；3P97计算机软件（数学药会）。受试药物：青霉素V钾片（简称试验药），重庆科瑞制药有限责任公司，批号：031102，规格：0.25 g/片，含量：101.3%；对照药物：华北制药股份有限公司青霉素V钾片（简称对照药），批号：0406205，规格：0.25 g/片；青霉素V钾标准对照品：简称PV（由重庆科瑞制药有限责任公司提供，纯度99.6%），精密称取PV适量，用适量甲醇溶解，置容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，配制成394 μg/mL储备液，备用；乙腈、甲醇等试剂均为分析纯。

　　1.2  试验对象20名健康男性志愿者，年龄（22.8±1.72）岁，身高（168.2±3.66）cm，体重（59.1±4.84）kg，体重偏差不超过中国人标准体重的10%。于试验前14 d进行筛选，全面体检及实验室检查，肝功能、肾功能、血常规、血压和心电图均正常，既往无肝、肾疾病史，无吸烟、饮酒史，受试前1月内未参加其他药物试验和3个月内未用过已知对脏器有损害的药物。经伦理委员会批准后，由志愿受试者签署知情同意书。

　　1.3  给药方案采用双制剂、两周期、双交叉试验设计，单剂量口服给药。20名受试者随机分为A、B两组，每组10人，在Ⅰ、Ⅱ阶段分别交叉口服试验药或对照药，交叉给药前经1周清洗期。试验前禁食12 h后，于次日晨8时青霉素皮试阴性后空腹吞服750 mg试验药或对照药（200 mL温开水服药）。服药当日统一标准餐。受试期间禁止剧烈活动，禁止吸烟、饮酒及饮用含酒精、咖啡因类饮料，试验期间禁服一切非试验药物。

　　1.4  样本采集受试者于服药前和服药后0.083、0.17、0.33、0.50、0.75、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0 h，抽取前臂静脉血2.0 mL，分离血清，低温（-20 ℃）保存，待测（注：报道［1，2］，本品Tmax为0.5 h左右，t1/2(β)为1 h左右)。间隔1周后交换口服另一种青霉素V钾片，按上法采取静脉血，分离血清，待测。

　　1.5  测定方法

　　1.5.1  色谱条件  色谱柱Discovery○RRP Amide C16，5 μm粒径，150 mm×4.6 mm ID，预柱；固定进样环50 μL。色谱条件［2］：流动相为乙腈0.01 mol/L CH3COONa为25∶75（V/V），流速0.8 mL/min；紫外检测波长为210 nm；柱温为30 ℃。此条件下PV与血浆中内源性物质分离良好（见图1）。

　　图1  高效液相色谱图　略

　　1.5.2  样品处理  取受试者血清0.1 mL，加甲醇0.3 mL，旋摇30 s，15 000 r/min离心10 min，取上清液进样50 μL。

　　1.5.3  标准曲线  在空白血清中分别添加PV使血药浓度相当于23.64、11.82、5.91、2.955、1.4775、0.7288、0.3694、0.1847、0.0924 μg/mL，按血清样品处理与测定方法进行处理和测定，所得数据经回归，PV面积Y与PV浓度X的标准曲线方程为：Y=25167.6098X+1278.3179，r=0.9998，线性范围：0.0924～47.28 μg/mL。最低定量浓度0.0924 μg/mL。

　　1.5.4  回收率及日内与日间精密度  按照标准曲线制作方法，采集高、中、低三个浓度，评价本法测定血清中PV含量的回收率及日内、日间相对标准差（RSD），结果见表1。

　　表1  精密度和回收率试验结果加入量（略）

　　1.5.5  冻融试验  将含药血浆反复冷冻（-20 ℃）、溶解，按样品处理后测定，5 d内测定3次，结果表明血浆样品5 d内反复冻融测定结果的稳定性良好（3.25±0.19 μg/mL，RSD=5.85%）。

　　1.6  数据处理采用3P97软件（数学药会）各受试者的药代动力学参数，Cmax、Tmax以实测值计算，AUC按梯形面积法计算，取值范围0～Tn。对两组的AUC、Cmax、Tmax用方差分析、双单侧t检验、（12α）置信区间法进行统计分析，判断其生物等效性。

　　2  结果

　　2.1  血药浓度及药时曲线20名受试者交叉口服试验药或对照药各750 mg后，测定青霉素V钾经时血药浓度，两组平均血药浓度时间曲线见图2。

　　图2  略

　　2.2  药代动力学参数及生物利用度两种药物有关药代动力学参数见表2。

　　表2  两种青霉素V钾片在人体内的药代动力学参数比较（略）

　　3  讨论

　　本研究对血浆中青霉素V钾的测定采用HPLC法，与报道［2］一致，本法具有简便、快速、重现性好、专属性强的特点。按照《中华人民共和国药典》2000年版“药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则”的规定评定，单剂量给药750 mg时，重庆科瑞制药有限责任公司研制的青霉素V钾片与华北制药股份有限公司生产的青霉素V钾片的主要药代动力学参数经配对t检验，差异无统计学意义（P>0.05），前者的相对生物利用度F为（94.02±16.31）%；对两组的AUC、Cmax进行方差分析，双单侧t检验，（12α）置信区间分别为（90.8～100.1）%和（81.4～122.2）%，统计结果表明两种制剂为生物等效制剂，与文献报道一致［3］。Tmax经非参数统计方法（Wilcoxon Method）检验后，差异无统计学意义（P>0.05）。青霉素V的抗菌谱与青霉素G相似，但抗菌活性略差，主要用于革兰阳性菌、革兰阴性球菌、嗜血杆菌属及各种致病螺旋体等［4］。本研究结果表明，重庆科瑞制药有限公司生产的青霉素V钾片与市售青霉素V钾片（华北制药股份有限公司）具有人体生物等效性，为临床医师用药提供了新的选择。

　　文献：

　　［1］ 陈新谦, 金有豫, 汤  光. 新编药物学［M］. 第15版. 北京: 人民卫生出版社, 2002: 50.

　　［2］  罗晓燕. 高效液相色谱法测定青霉素V钾片的含量［J］. 安徽医药, 2001, 5(2): 146.

　　［3］  张莉蓉, 乔海灵, 郜  娜, 等. 青霉素V钾健康人体药物动力学及相对生物利用度［J］. 中国抗生素杂志, 2000, 25(4): 289291.

　　［4］  戴自英. 实用抗菌药物学［M］. 上海: 上海技术出版社, 1998: 110114.

　　1. 重庆医科大学附属第一药剂科，重庆  400016；2. 重庆医科大学附属第一医院临床药理研究基地，重庆  400016