壳聚糖用于中药复方制剂健脑益智合剂澄清工艺的实验研究

           作者：蒋志平，李国强，何周康，龙荣，彭骞

【摘要】  目的：研究并探讨壳聚糖澄清剂在中药复方制剂健脑益智合剂中的澄清作用。方法：通过絮凝澄清法筛选壳聚糖澄清剂在该澄清工艺中的最佳浓度。结果：在室温常压下，浓度为0.6 g/L壳聚糖对健脑益智合剂的澄清效果好，且能较好地控制葛根素的含量在0.4 g/L以上。结论：壳聚糖澄清剂可以用于中药复方制剂健脑益智合剂的澄清工艺。

【关键词】  壳聚糖；健脑益智合剂；葛根素

健脑益智合剂是根据传统中医理论和药学研究成果相结合设计而成的新配方，处方主要由鹿茸、益智仁、葛根、黄芪等20味中药组成，具有补肾益精、健脾益气、健脑益智的功效，主要用于儿童大脑发育不良、缺氧缺血性脑病、迁延期脑瘫、脑膜炎后遗症等。该合剂属于中药复方制剂，成分复杂，水提浓缩液中往往含有大量的树脂状胶体物、鞣质、纤维素、淀粉、蛋白质等无活性杂质成分。该制剂的澄明度主要取决于水提浓缩液的澄清度，采用传统的水提醇沉法来澄清浓缩液，其工艺复杂，酒精消耗大，存在防爆安全隐患，工期长、耗能多、总成本高，且澄清效果不理想［1］。现改用壳聚糖澄清剂来澄清水提浓缩液，可使水提浓缩液迅速澄清，再经滤过而达到精制目的，同时通过HPLC测定某一指标成分的含量来控制该制剂的质量［2?5］。本文将为壳聚糖作为中药水提液澄清剂的可行性及应用前景提供一些依据和。

　　1  仪器与试剂

　　1.1  仪器
    　　
　　“磁极”牌80?2离心沉淀器（上海手术器械厂），Agilent 1100高效液相色谱仪（美国）（低压四元泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器、Chemstions工作站）。

　　1.2  药品
    　　
　　药材购于三湘中药饮片公司，经鉴定均符合2005年版《药典》一部有关要求。葛根素标准品购于中国生物制品检定所（753?200007）。甲醇为色谱纯（天津市科密欧化学试剂开发中心）。水为重蒸馏水（湖南省儿童制剂室自制）。壳聚糖澄清剂用食品级原料，临用时用沸水配成10 g/L的澄明胶体溶液。

　　2  方法与结果

　　2.1  处方及制备
    　　
　　处方由鹿茸、益智仁、葛根、黄芪、枸杞子、丹参等20味中药组成。将鹿茸与菟丝子等19味中药分开煎煮3次，合并煎煮液，滤过，取上清液浓缩，最后加单糖浆和适量防腐剂，分装于洁净的玻璃瓶中，热压灭菌（110 ℃，0.075 MPa）30 min即可。

　　2.2  壳聚糖澄清剂的配制
    　　
　　称取壳聚糖5 g，加适量纯化水，适当加热，配成10 g/L的壳聚糖胶体溶液500 mL。

　　2.3  不同体积壳聚糖澄清剂的澄清效果考察
    　　
　　取健脑益智合剂药液6组，每组5份，每份80 mL，在均匀搅拌下，分别加入10g/L的壳聚糖胶体溶液0 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL和15 mL，随后往每份溶液中加入适量纯化水至100 mL，摇匀，2 000 r/min分次离心5 min，分离沉淀至烧杯，置100 ℃恒温烤箱烘干30 min，取出冷却至室温，称量沉淀重量。取离心后的上清液，室温下静置12 h，观察澄清效果。

　　2.5  样品溶液的配制
     
　　精密量取沉淀离心后的健脑益智合剂上清液5.0 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液用于HPLC分析。

　　2.4  葛根素含量测定
    　　
　　参照［6］用高效液相色谱法测定指标成分“葛根素”的含量。

　　3  结果
    　　
　　结果见表1。由表1可见，加入壳聚糖澄清剂后可使健脑益智合剂澄清，且随壳聚糖澄清剂用量的增加，上清液的颜色逐渐变浅，离心沉淀量逐渐增加，指标成分葛根素的含量逐渐下降。与未加用壳聚糖澄清剂相比，差异均具有统计学意义。表1  加入不同浓度的壳聚糖后样品溶液的各项指标的变化（略）注：表中所列t值及P值均为与对照组相比。

　　3  讨论
    　　
　　本文主要参照文献［6］的方法对指标成分葛根素的含量进行测定，因为本文考察的制剂与该文献报道的制剂为处方、制备工艺均完全相同的同一制剂。
    　　
　　絮凝澄清法是在中药提取液或中药提取浓缩液中，加入一种澄清剂以吸附架桥和电中和方式除去溶液中粗粒子，以达到分离纯化的一种方法［5］。从实验结果可以看出：（1）随着壳聚糖澄清剂添加量的增加，药液中的沉淀量明显增多，药液颜色也逐渐由深变浅。由此可见壳聚糖对大分子的树脂、树胶、蛋白质、色素等有较强的凝聚作用，从而起到除杂作用；（2）随着壳聚糖澄清剂添加量的增加，药液中的指标成分葛根素含量也逐渐下降，而未添加澄清剂的对照品液，放置后不久便出现浑浊，继而有沉淀产生。曾有报道［6］健脑益智合剂中葛根素含量以不少于0.4 g/L作为质量控制参考。为保证澄清效果，同时保证该制剂的质量，最终选择采用浓度为0.6 g/L的壳聚糖澄清剂；（3）本实验测定的只是指标成分葛根素的含量，壳聚糖澄清剂对该制剂水提浓缩液中其它成分的影响还有待进一步实验研究。

【参考文献】
  ［1］陈贵生. 中药糖浆剂沉淀过多的原因及解决办法［J］. 药业, 2000, 9(5): 30.

　　［2］陈章荣, 徐开俊, 吴洪元, 等. 壳聚糖对黄芪煎煮液的絮凝作用［J］. 中国药科大学学报, 1999, 30(3): 227?230.

　　［3］黄秉南, 杨义雄. 壳聚糖澄清剂用于中药提取液澄清工艺的实验［J］. 海峡药学, 2002, 14(4): 11?12.

　　［4］彭智聪, 张少文, 刘德焱, 等. 壳聚糖用于清热解毒口服液澄清工艺的探讨［J］. 中成药, 2000, 22(4): 299?300.

　　［5］张 彤, 徐莲英, 蔡贞贞, 等. 壳聚糖澄清剂精制中药水提液的应用前景［J］. 中国中药杂志, 2001, 26(8): 516?519.

　　［6］阳利龙, 银雪花, 何周康, 等. 高效液相色谱法测定健脑益智合剂中葛根素的含量研究［J］. 中医药导报, 2005, 11(6): 64?66.