Survivin在大肠癌组织中的表达及其生物学意义
作者：任佳 曾俊 王西岩 潘克俭
【摘要】 目的 研究Survivin在结肠癌、直肠癌中的表达，以及与癌组织分化程度的相关性。方法 收集资料齐全的大肠癌、直肠癌标本，并按组织学标准分级。免疫组织化学检测各标本Survivin蛋白的表达。结果 绝大多数的大肠癌、直肠癌标本组织有Survivin表达，Ⅰ级组织的表达阳性细胞平均比率低于Ⅱ级。提示其表达与癌症组织分化程度相关。结论 检测Survivin基因的表达,将有助于检测肿瘤的恶性程度，同时,为判断结肠癌和直肠癌的生物学特性提供了重要依据。
【关键词】 Survivin;大肠癌;组织学分级
Abstract：Objective To explore the survivin expression in large intestine tumour tissues,and explore the correlation between survivin expression and the differentiation degree of tumour tissues.Mathods Identified the histological grades of large intestine tumour tissues,and detected the survivin expression by immunohistochemical method.Results The expression of survivin was detected in most samples.The rate of expression of surviving in grade Ⅱwas significantly higher than that in grade Ⅰ.Conclusion It can be inferred that the detection of Survivin expression level is beneficial to ascertain the malignant grade of large intestine tumor issues and refers a significant evidance to judge its biological charaters.
Key words：Survivin；large intestine tumour；Histilogical grade
生存素(Survivin)为凋亡蛋白抑制因子(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族的成员［1］。研究表明，Survivin能抑制细胞的凋亡；同时能抑制细胞的增殖。现已发现Survivin在多种肿瘤中表达，而在正常组织不表达或低表达［2］。本研究以大肠癌为研究对象，研究Survivin在不同组织学级别的大肠癌和直肠癌组织中的表达，探讨Survivin表达水平和肿瘤恶化进程的关系。
1 材料与方法
1.1 样本
选取成都军区总病理科资料齐全的大肠癌和直肠癌标本，按肿瘤组织学分级标准，所收集的标本被分为Ⅰ、Ⅱ级。其中大肠癌Ⅰ级12例，Ⅱ级14例；直肠癌Ⅰ级15例，Ⅱ级14例。组织学分级由成都军区总医院病理科完成。
1.2 试剂
兔抗人Survivin多克隆抗体为Santa cruz公司产品；二抗、三抗、DAB显色剂、封闭羊血清均为北京中山生物技术公司产品。
1.3 实验方法
1.3.1 免疫组织化学染色 切片脱蜡至PBS；3%H2O2室温10min，去除内源性过氧化物酶，PBS洗2次，每次3min；正常羊血清37℃,30min封闭；弃去血清，分别加一抗(兔抗人Survivin 1∶600)，4℃过夜，PBS洗2次，每次3min；滴加二抗(Survivin羊抗兔1∶200)，37℃，30min，PBS洗2次，每次3min；滴加三抗（1∶200），37℃，30min，PBS洗3次，每次3min；DAB显色；苏木精复染；梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。用PBS代替一抗作阴性对照。所有标本的免疫组织化学染色均按双盲法进行，同一批完成。
1.3.2 结果分析 细胞质内有棕色着色者为Survivin表达阳性，每例切片观察8个高倍视野,以计数1 000个细胞中的阳性细胞百分比为标准,具体评分如下:表达阳性细胞0～9%为阴性(-)；10%～24%为弱阳性表达(+)；25%～49%为中度表达(++)；≥50%为强阳性表达(+++)。
1.4 统计学处理各项参数经量化处理后输入机,应用SPSS10.0统计分析软件,对结果行相关分析,结果均以P＜0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 大肠癌组织细胞表达
绝大多数的大肠癌标本组织有Survivin表达阳性细胞，Survivin蛋白阳性染色主要定位于肿瘤细胞胞质和胞膜中，为粗细不一的棕黄色颗粒，阳性细胞呈局灶性或弥漫性分布。结肠癌组织的表达阳性细胞平均比率Ⅰ级明显低于Ⅱ级，说明Survivin蛋白表达与大肠癌分化程度相关，即分化程度愈低，Survivin表达越强（表1）（见封四图1）。
2.2 直肠癌组织细胞表达
直肠癌标本组织均有Survivin表达阳性细胞，直肠癌组织的表达阳性细胞平均比率Ⅰ级明显低于Ⅱ级，说明Survivin蛋白表达与直肠癌分化程度相关（表2）（见封四图2）。
3 讨论
Survivin为凋亡蛋白抑制因子(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族的成员,Survivin基因过度表达抑制了细胞凋亡,从而有利于细胞的异常增殖和恶性转化。研究表明，Survivin蛋白的抗凋亡功能在于直接抑制了半胱氨酸蛋白酶Caspase-3和Caspase-7的活性，也可通过p21间接抑制Caspase,阻断了细胞的凋亡过程［3］。与IAP家族的其它蛋白不同,Survivin对细胞凋亡和细胞分裂周期具有双重调控作用。Survivin存在于有丝分裂纺锤体中,在G2/M期通过周期调控的方式表达并可能抑制有丝分裂期细胞的凋亡，从而维持有丝分裂的正常进行。有报道发现在消化道肿瘤、泌尿系肿瘤、淋巴造血系统肿瘤、肺癌、乳腺癌均出现Survivin表达,在癌旁正常组织中均无表达［4～6］。 表1 Survivin在大肠癌组织中表达表2 Survivin在直肠癌组织中表达选取大肠癌和直肠癌组织学Ⅰ、Ⅱ的标本，研究Survivin的表达水平与肿瘤细胞恶性转化之间的关系，结果显示大肠癌和直肠癌细胞阳性染色率按Ⅰ级、Ⅱ级顺序递增，说明Survivin蛋白表达与大肠癌和直肠癌分化程度相关，即分化程度愈低，Survivin表达越强；实验结果提示，Survivin的表达可能与肿瘤恶性转化的过程相关，检测Survivin基因的表达,将有助于预测大肠癌和直肠癌的恶性程度，同时,为判断大肠癌和直肠癌的生物学特性提供重要依据。也显示了Survivin有可能成为抗肿瘤免疫的一个可行的靶点。
【】
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