电针对大鼠脑缺血急性期治疗机理及神经保护作用的研究

【摘要】  目的 探讨电针对大鼠脑缺血急性期机理及脑组织自由基水平与神经功能缺损的相关性。方法 53只健康的雄性Wister大鼠，随机分为针灸组、模型组、对照组。采用光化学法复制局灶性脑缺血急性期动物模型。分别在术后3h、24h检测脑组织中MDA含量和SOD活性，同时进行神经行为学观察和神经功能缺损评分。结果 模型组脑缺血后3 h MDA含量已明显增高，24 h其值为正常组的3倍(P<0.01)。电针组24 h MDA含量相对降低，由(4.02±0.31)mol·ml-1降为(2.01±0.54)mol·ml-1，与模型组相比，P<0.05；电针组24h SOD的活性明显增高，由（66±1.24）nu/mg pro上升为（103±2.54）nu/mg pro，与模型组相比，P<0.05。神经功能缺损Zea Longa法评定显示，24 h电针组的神经功能缺损程度明显低于模型组，其神经功能缺损程度与脑组织MDA含量呈负相关，与SOD活性呈正相关。结论 电针可以通过干预大鼠缺血性脑组织自由基水平，对脑组织起保护作用，同时自由基的水平与脑缺血后神经功能的缺损程度有密切关系(P<0.05)。

【关键词】  局灶性脑缺血模型大鼠 电针 丙二醛 超氧化物岐化酶

    THERAPITIC AND NEUROPROTECTIVE EFFECT OF ELECTRI

    Abstract  Objective  To study the mechanism of electric acupuncture on acute cerebral ischemia and free radical level in brain tissue correlated with degree of neurologic impairment in rats.  Methods 53 Wister rats were divided into electric acupuncture therapy group and control group. Rats' focal cerebral ischemia in acute stage was induced by photochemistry method. Changes in contents of MDA and in activity of SOD in brain homogenate were observed at 3h and 24h.The degree of neurologic impairment was examined by Zea Longa' law. Results  After 3h the contents of MDA in brain ischemia tissue increased, and at 24h it increased by 3 times compared with control group. MDA contents at 24h in the acupuncture therapy group dropped significantly from 4.02±0.31 mol·mL-1 to 2.01±0.54 mol·mL-1(P<0.05). Compared with the model group SOD activity at 24h was significantly raised from 66±1.24 nu/mg pro to 103±2.54 nu/mg pro (P<0.05). Zea Longa law evaluation showed that at 24h degree of neurologic impairment in the acupuncture therapy group was lower than the model group. The score of neurologic impairment had obvious negative correlation with the level of MDA and obvious positive correlation, by contrast, with activity of SOD in brain homogenate.  Conclusion  In acute stage,  acupuncture treatment can protect ischemia brain tissue and lessen the degree of neurologic impairment.

    Key words  Cerebral ischemia model rats  Electric acupuncture  MDA  SOD

    急性脑卒中后尽快改善脑部血液循环，纠正脑组织缺氧、维持神经细胞存活和促进神经生长是治疗本病的关键。目前除了早期的药物治疗以外也在行针灸治疗。本研究拟通过观察电针对脑缺血急性期大鼠脑组织自由基水平的影响，以及分析脑组织自由基水平与神经功能的相关性，探讨脑缺血急性期应用电针治疗的机理和意义，为临床缺血性脑血管疾病早期应用电针治疗奠定理论基础。

    1  材料与方法

    1.1  材料

    Wister雄性大鼠,12周,体重(250±50)g，二级动物。MDA、SOD测试盒(均购自南京建成生物工程研究所)；WFZ800-D3A型单光束紫外/可见分光光度计(北京第二光学仪器厂)；G6805针灸仪（上海医用电子仪器厂）。

    1.2  实验方法

    1.2.1  实验分组：将53只大鼠分为正常对照组(假手术组）12只、模型组22只、电针治疗组19只。根据缺血时间的不同，每组又随机分为3h和24h两组。

    1.2.2  模型制备：采用光化学法［1］并略加改进,左侧颞部入路,牙科钻开直径5 mm的骨窗暴露大鼠大脑中动脉起始部及嗅束至大脑下静脉间的一段MCA为光照部位。光照分二步,首先股静脉注入虎红B［15g·L-1(0.03g·kg-1)］,持续光照MCA起始部10 min,再经股静脉注入半量15g·L-1的虎红B，再光照嗅束至大脑下静脉间的MCA段10 min，造模完成。正常对照组仅进行骨窗暴露。

    1.2.3  治疗方法：将大鼠用脑立体定位仪固定，选取百会、水沟、内关、合谷、足三里穴，以32号毫针刺入,进针0.1～0.2 cm后连接至电子针灸仪的输出电极上，选用频率为30～50 Hz交替的等波幅的疏密波,刺激强度以大鼠肢体轻微颤动为宜。电针第一次实施在造模后1 h，此后1次/6 h，10 min/次。模型组：对造模成功的大鼠，在同等条件下进行大鼠的抓取但不实施电针治疗。

    1.2.4  MDA含量和SOD活性测定：术后3 h、24 h分别将断头置冰块上取脑并用冰冷的生理盐水冲洗，滤纸拭干，取病灶侧脑组织块1 g，称重剪碎加入生理盐水［1:9(W:V)］放入匀浆器碾磨，使组织充分匀浆，离心取上清液制备成10%组织匀浆液待测。MDA测定采用硫代巴比妥酸(TDA)比色法，利用可见分光光度计在波长532 nm处测定，单位：nmol·mL-1。SOD测定采用黄嘌呤氧化酶法，单位：nu/mg蛋白(pro)。具体操作步骤按试剂盒说明书进行。

    1.2.5  脑缺血大鼠行为学观察和神经功能缺损评分（NSS）：连续观察造模后大鼠的行为学表现，并按Zea Longa的6级评分法评分［2］：0分，无功能障碍；1分，不能伸展前肢；2分，向一侧旋转；3分，向一侧倾倒；4分，无自主活动伴意识抑制；5分，死亡。

    1.3  统计处理方法

    采用SPSS11.0软件包，实验数据以x±S表示，组间比较采用单因素方差分析，相关性检验采用Ken-dall’s  tau-b相关检验。

    2  结果

    2.1  电针对局灶性脑缺血急性期大鼠脑组织MDA含量和SOD活性的影响

    模型组MDA含量在3h时已增多并持续上升，24 h其值达正常组3倍(P<0.01)；SOD活性3 h时已明显低于正常组，在24 h下降至最低点(P<0.01)；而电针组3 h时MDA含量与模型组相比已有所下降，24 h时MDA含量已明显下降，由(4.02±0.31)mol·ml-1下降为(2.01±0.54)mol·ml-1，3h时SOD的活性与模型组相比有明显增高，24 h时电针组SOD的活性为(103±2.54) nu/mg pro，而模型组为(36±3.58) nu/mg pro，统计学处理显示差异有显著性(P<0.05)。详细结果见表1。

    2.2  电针对局灶性脑缺血急性期大鼠神经功能行为学的影响

    从结果看，造模成功大鼠清醒后即有精神差、反应差、活动减少及前肢障碍等不良表现，手术对侧肢体肌力、肌张力下降，前肢出现腕、肘屈曲及肩内旋等偏瘫样改变。模型组有1只在2 h内、3只在24 h内死亡外，其余可见随着时间延长大鼠的症状逐渐加重，其中24 h时有5只大鼠完全不能站立。电针  表1电针对脑缺血急性期大鼠脑组织MDA含量和SOD活性的影响注:﹡与正常组比较P＜0.05； ▲与模型组比较P＜0.05. 组除1只在3h死亡外，其余大鼠在24 h时大部分能够伸展前肢，屈曲后肢，可以进行适量活动，反应较好。Zea Longa法量化评分可见24 h时电针组分值明显低于模型组（P＜0.05）；而模型组Zea Longa法量化分值由3 h的(3.50± 0.53)上升为24 h的(4.67±0.50)，说明功能缺损加重，统计学处理显示有显著差异（P＜0.05）。详细结果见表2。表2神经行为学障碍量化（Zea Longa法）计分表注：▲与模型组比较P＜0.05；﹡同组前后比较P＜0.05.

    2.3  24 h Zea Longa法评分与脑组织MDA含量和SOD活性相关分析

    相关分析显示，脑梗死神经功能评分与MDA含量呈负相关,相关系数为-0.62；与SOD活性呈正相关,相关系数为0.67。相关系数检验均显示有统计学意义(P<0.05)。

    3  讨论

    目前已有大量的资料证明脑梗死后,自由基所造成的脂质过氧化是缺血性脑组织损伤的重要发病机制,氧自由基损伤可能是始动点［3,4］。本实验中观察到大鼠脑缺血后3h时MDA含量明显增高,并持续上升,说明脑局灶性缺血形成后脑组织的破坏呈进行性,与脑组织中的MDA含量成平行关系。SOD活力下降与MDA含量增多有关。

    针刺是利用针灸刺激腧穴激发机体生理潜能，通过机体内源性生理调节而防治疾病。本实验取百会穴为主穴。针刺百会以培本扶正、宣阳通督、醒神开窍；内关有养心安神、疏通气血的功能；足三里有疏通经络、行气活血的作用［5］。在试验中我们观察到电针组与模型组相比各阶段MDA含量显著降低,SOD活性升高，说明针灸具有内源性调节作用。电针通过疏通经络、行气活血的作用清除MDA生成，减少SOD的消耗，增强SOD的催化超氧阴离子自由基的歧化反应，从而维持神经细胞存活，减轻神经功能的缺损。Zea Longa法量化评分显示电针组大鼠的神经功能缺损明显好于模型组，其缺损程度与MDA含量呈负相关；与SOD活性呈正相关。降低氧自由基，减轻神经功能缺损的程度是电针缺血性脑血管疾病的另一机理。

【】
  ［1］ 施新猷，王四旺，顾为望，等.比较医学［M］.西安：陕西技出版社,2005.582-583

［2］ Zea Longa E,Weinstein Arlson .Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats［J］. Stroke 1989，20(1):84

［3］ 张玉凤,张桂云,杨晓华.针刺透穴配合康复训练治疗中风偏瘫的疗效观察［J］.中医药信息杂志，2002，9(7)：58

［4］ Adelsonpd, Dixonce, Kochanekpm. Long-term dysfunction following diffuse traumatic Brain injury in the immature rat［J］. Neurotrauma,2000,17(4):273

［5］ 曹文胜,熊政瑜.电针为主促醒持续性植物状态26例疗效观察［J］.中国针灸, 2003,23(9)：511-513