结核病人血清IL?17、TNF?α、IFN?γ的检测及其免疫学意义

                  作者：项杰 章晓联 席淑红 李虹泽 胡加炎

【摘要】  目的: 探讨白细胞介素17 (IL?17) 、肿瘤坏死因子α（TNF?α）及干扰素γ( IFN?γ) 在结核病免疫机制中的作用。 方法: 采用ELISA 法测定31 例新发结核未病人，25例结核治疗好转病人IL?17、TNF?α,IFN?γ水平,并用26 例正常健康人作对照。 结果: 结核未治疗病人组血清IL?17、TNF?α明显高于对照组( P< 0.01) ,结核治疗好转病人组血清IL?17、 TNF?α则明显低于结核未治疗病人组( P< 0.01) 。结核未治疗病人组血清IFN?γ明显低于对照组( P< 0.01) ,结核治疗好转病人组血清IFN?γ则明显高于结核未治疗病人组(P< 0.01) , 结核未治疗病人组和结核治疗好转病人组IL?17与TNF?α呈正相关( r = 0.6605, r= 0.7605，P< 0.001) 。 结论: 人体感染结核杆菌后,IL?17增高, TNF?α升高，IFN?γ减低,炎症加重，可能引起免疫功能失衡,是导致结核病的发病因素之一，但经过治疗后,IL?17降低, TNF?α降低，IFN?γ升高，炎症反应减轻，病情趋于好转。

【关键词】  结核; 白细胞介素17; 肿瘤坏死因子α; 干扰素γ

人体感染结核杆菌后不一定发病,仅在抵抗力降低时发病。从免疫学观点看,结核病是一免疫紊乱性疾病［1］。IL?17具有强大的招募激活中性粒细胞的作用。体内外研究发现IL?17可以促进气道上皮细胞或成纤维细胞释放IL?8、G?CSF等细胞因子招募中性粒细胞至气道，激活弹力酶和髓样过氧化物酶后间接激活中性粒细胞的活性,促进炎症的形成［2～4］。干扰素γ( IFN?γ)是单核巨噬细胞的强激活剂,能够激活巨噬细胞，促进对结核杆菌的吞噬［5～7］，而结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染的单核巨噬细胞则通过TNF?α依赖的途径引起凋亡［8，9］。这几种细胞因子可能在结核病的发病机制中起着重要的作用。但结核病人中IL?17是如何变化的，与其他细胞因子IFN?γ、 TNF?α的变化是否有相关性，本组采用ELISA 法测定结核病人IL?17 、TNF?α，IFN?γ水平,以探讨其在结核病免疫机制中的作用。

    1  材料与方法

    1.1  主要试剂

    IL?17 、TNF?α、IFN?γ试剂盒均购自eBioscience 公司

    1.2  研究对象

    结核病未治疗组为结核病患者31 例,其中男16 例,女15 例,年龄25 ～65 岁,系2007 年3 月至2008 年11 月我院住院病人。临床有低热、盗汗、咳嗽、咯血等症状,血像升高，痰培养阳性，结合X线表现或病原学、病检查确诊病人。结核病治疗组的结核病患者25 例，其中男15 例,女10 例,年龄30～75岁,为在我院住院确诊为结核病且经抗痨治疗1个月后病灶逐渐吸收好转者。所有病例均无心、肝、肾等脏器合并症,无糖尿病、肿瘤等免疫相关性或免疫性疾病,4周内未用过激素或免疫调节剂。正常对照组为健康志愿者共26 例,排除心、肝、肾等疾病,其中男19例,女7 例,年龄22～60 岁。

    1.3  实验方法

    常规收集血清, IL?17 、TNF?α、IFN?γ含量测定采用ELISA 法,按试剂盒说明书操作,在450nm处读取光密度值。

    1.4  统计学处理

    用EXCEL 软件处理数据,各计量资料以x ±s 表示,两样本均数的比较采用t 检验;两因素相关分析采用直线相关分析,检验水准α= 0.05 ,以P< 0.05 为差异有显著性意义。

    2  结果

    2.1  结核病人血清IL?17的检测结果显示，结核病未治疗组病人血清IL?17水平比正常对照组高（P<0.01），但经过治疗后，IL?17水平明显下降（P<0.01）。

    2.2  结核病人血清TNF?α的检测结果显示，结核病未治疗组病人血清TNF?α水平比正常对照组高（P<0.01），但经过治疗后，TNF?α水平明显下降（P<0.01）。

    2.3  结核病人血清IFN?γ的检测结果显示，结核病未治疗组病人血清IFN?γ水平比正常对照组低（P<0.01），但经过治疗后，IFN?γ水平明显升高（P<0.01）。

    2.4  血清IL?17与TNF?α的相关性分析

    经过对IL?17与TNF?α进行直线相关分析发现,对照组的IL?17与TNF?α无相关性( P> 0.05) ,结核未治疗组和结核治疗组病人血清IL?17与TNF?αγ呈正相关(r=0.6605, r=0.7605，P<0.01)。

    2.5  血清IL?17与IFN?γ的相关性分析

    经过对IL?17与IFN?γ进行直线相关分析发现,对照组、结核未治疗组和结核治疗组病人的IL?17与IFN?γ均无相关性(P>0.05) 。

    3  讨论

    一般认为,结核分枝杆菌侵入机体后,结核病的发生和转归不仅取决于结核分枝杆菌的数量和毒力,在很大程度上还取决于机体的免疫状态［10］。结核病患者通常存在免疫功能紊乱,即体液免疫亢进、细胞免疫低下, 但抗结核免疫主要是细胞免疫［11］。IL?17是目前新发现的主要由CD4 记忆T淋巴细胞、单核细胞等分泌的一种前炎性细胞因子，具有强大的招募中性粒细胞、促进多种细胞释放炎性因子、促进细胞增殖等多种生物学作用［12，13］。最近的研究发现结核病患者体内的γδT细胞也能够分泌IL?17，同时γδT细胞还是衔接固有免疫与适应性免疫的桥梁细胞，在抗结核感染中发挥重要作用［14］。因此IL?17在招募中性粒细胞聚集感染部位吞噬细菌的同时，也加重了感染部位的炎症反应。我们的结果显示结核病未组的患者IL?17水平升高，说明炎症加重，但经治疗一段时间后，IL?17水平明显下降，炎症反应降低。

    巨噬细胞感染Mtb后所发生的反应是产生TNF?α, TNF?α对Mtb感染的保护性免疫起着关键性的作用;同时, TNF?α还是一种多效性的细胞因子,体内适量的TNF?α对机体抗感染有一定的保护作用,而分泌过多时可致病情恶化［9］。Mtb通过TNF?α依赖的途径引起单核巨噬细胞的凋亡,而且TNF?α在防止持续性TB再燃中有重要作用。

    结核杆菌主要寄生在巨噬细胞内, IFN?γ 是单核巨噬细胞的强激活剂,可促使巨噬细胞产生抗菌分子,发挥杀灭结核菌的作用［6，7］。我们的结果显示,结核病未治疗组IFN?γ比对照组低,但经过治疗后，IFN?γ水平明显升高。

    结核病患者大多免疫功能低下,而免疫功能低下又可加重结核病,两者互为因果,造成恶性循环。通过IL?17 、TNF?α的相关性分析发现,在正常对照组中, IL?17 、TNF?α无明显相关性,而结核患者无论是治疗组还是未治疗组血清IL?17 、TNF?α呈正相关,提示人体感染结核杆菌后,IL?17 增高，TNF?α增高,此虽然能够增加粒细胞的聚集与吞噬，但本身也加强了炎症的反应，并可使病情恶化。故两者检测在结核病患者中可作为估计病情及预后的指标。

【】
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