结直肠癌中PTEN蛋白的表达

【摘要】  目的 探讨结直肠癌中PTEN蛋白的表达及其与侵袭和转移的关系。方法 应用免疫组化SP法检测67例结直肠癌中PTEN、E?cad、MMP?2的表达情况，5例正常大肠黏膜作对照。结果 PTEN蛋白表达定位于细胞质。与正常大肠黏膜相比，癌组织中PTEN表达明显降低，并随分化程度降低呈递减趋势；淋巴结转移组明显低于无淋巴结转移组；与浸润深度呈负相关。结直肠癌中PTEN表达与E?cad呈正相关，与MMP?2呈负相关；淋巴结转移组 PTEN、E?cad低表达且MMP?2高表达的人数明显高于无淋巴结转移组。结论 PTEN、E?cad低表达，MMP?2高表达在结直肠癌的侵袭和转移过程中可能起协同作用，联合检测可为结直肠癌生物学行为判定和进一步的研究和提供有效病依据。

【关键词】  结直肠癌 PTEN E?cad MMP?2 免疫组化

　　0  引言
   
　　PTEN是迄今发现的第一个具有双重特异性磷酸酶活性的抑癌基因，在参与细胞周期调控、抑制细胞迁移、扩散和转移等方面具有重要作用[1]，但尚需深入研究。本研究采用免疫组化SP法检测结直肠癌中PTEN的表达情况，并分析其表达与生物学行为以及与E?cad和MMP?2表达的关系，为结直肠癌的进一步研究和治疗提供病理学依据。

　　1  材料和方法

　　1.1  病例  收集邢台市人民2000年11月～2002年10月期间手术切除经病理证实的结直肠癌存档蜡块67例。按照2000年WHO结直肠肿瘤组织学分级标准分类，高、中、低分化腺癌分别为21、15和31例。有淋巴结转移的36例，无淋巴结转移的31例。另选5例正常大肠黏膜作对照。标本经10%中性福尔马林液固定，常规取材、脱水，石蜡包埋，4μm厚连续切片，分别做HE及免疫组化染色。

　　1.2  试剂  鼠抗人PTEN、E?cad、MMP?2单克隆抗体（均为即用型）和SP试剂盒及DAB显色剂均购自福州迈新生物技术开发公司。

　　1.3  免疫组化染色方法  采用SP法。 切片常规脱蜡水化，枸橼酸盐缓冲液微波抗原修复（MMP?2除外）,分别滴加一抗，4℃湿盒过夜，DAB显色，苏木素复染。用PBS代替一抗作阴性对照。

　　1.4  结果判定标准  PTEN、MMP?2表达定位于胞质，E?cad表达定位于细胞膜，阳性信号呈黄～棕褐色颗粒。每例均随机观察10个高倍视野，参照有关研究[1，2]，用半定量积分法判断结果。为确保实验结果评估的准确性，所有病例均经2名有经验的病理科医生进行光镜观察共同确诊。

　　1.5  统计学分析  应用SPSS10.0统计软件对实验结果进行χ2检验、Kruskal?Wallis秩和检验、Spearman等级相关分析。

　　2  结果

　　2.1  PTEN在正常大肠黏膜及结直肠癌组织中的表达  5例正常大肠黏膜组织中PTEN蛋白表达均为阳性,定位于上皮细胞胞质内，其中，强阳性占80%。67例癌组织中，PTEN阳性表达占83.5%，其中强阳性占47.7%，部分病例表达降低或缺失。癌组织中PTEN蛋白的阳性表达低于正常大肠黏膜，见图1～3。

　　2.2  结直肠癌中PTEN表达与临床病理特征的关系  PTEN在高、中、低分化腺癌中的表达呈逐步降低趋势（χ2=23.339，P<0.01）；在T3～T4组表达明显低于T1～T2组（χ2=4.644，P<0.05）；在淋巴结转移组的表达明显低于无淋巴结转移组（χ2=14.18，P<0.01）。PTEN蛋白表达与性别、年龄和病变部位间，均未发现有显著相关性，见表1。

　　表1  67例结直肠癌中PTEN表达与临床病理特征的关系（略）

　　*：侵犯肌层以内；**：侵犯肌层以外

　　2.3  结直肠癌中PTEN表达与E? cad、MMP?2表达的关系  见表2。

　　表2  结直肠癌中 PTEN的表达与E?cad、MMP?2表达的关系（略）

　　结直肠癌中PTEN与E?cad表达呈正相关（r=0.65，P<0.01），与MMP?2表达呈负相关（r=?0.279，P<0.05）。值得注意的是，在31例无淋巴结转移的病例中，PTEN和E?cad高表达、MMP?2低表达者13例，占41.9%，而有淋巴结转移的36个病例中仅2例，占5.6%，两组具有明显差异（P<0.01）；有淋巴结转移的36个病例中，PTEN和E?cad低表达、MMP?2高表达者17例，占47.2%，在31例无淋巴结转移的病例中仅有2例，占6.5%，两组亦具有明显差异（P<0.01）。

　　3  讨论

　　3.1  结直肠癌中PTEN的表达及意义  近几年研究发现，人类许多恶性肿瘤如胶质母细胞瘤、恶性黑色素瘤、子宫内膜癌、乳腺癌等都存在着PTEN基因异常。PTEN基因突变、杂合性缺失和过甲基化等遗传学改变是构成PTEN表达下调的分子基础[3]。本实验研究发现，结直肠癌中PTEN蛋白表达分布呈弥漫性或散在性或缺失，与正常大肠黏膜组织相比明显降低（P<0.05），说明结直肠癌中PTEN蛋白表达存在下调或缺失现象。同时发现PTEN蛋白在高分化、中分化、低分化腺癌中的表达呈逐步降低趋势；有淋巴结转移的病例明显低于无淋巴结转移的病例；与浸润深度呈负相关。这说明结直肠癌中PTEN蛋白的表达降低或缺失，可能赋予了癌细胞比较强的侵袭和转移潜能，参与了结直肠癌的侵袭和转移过程。

　　3.2  结直肠癌中 PTEN表达与E?cad、MMP?2表达的相关性  E?cad是一种跨膜糖蛋白粘附分子，主要介导细胞间的同质型粘附。研究表明，其表达程度和功能状态直接影响瘤细胞间的粘着力，与侵袭和转移密切相关[4]。MMP?2是锌离子依赖性蛋白酶家族成员之一，在降解细胞外基质和基底膜，促进瘤细胞向周围组织浸润和转移方面起重要作用[5]。本实验发现，结直肠癌中PTEN表达与E?cad呈正相关，与MMP?2呈负相关，淋巴结转移组 PTEN、E?cad低表达且MMP?2高表达者的人数明显高于无淋巴结转移组。这说明肿瘤的侵袭和转移是一个多因素、多步骤过程，E?cad低表达可导致细胞间粘附力减弱，使得癌细胞易于脱离原发瘤，MMP?2高表达能够促进周围细胞外基质的降解,为瘤细胞迁移扫除屏障，PTEN低表达则通过影响integrin介导的MAPK信号转导途径，促进瘤细胞的迁移和扩散。PTEN与E?cad、MMP?2表达的相关性说明三者在肿瘤的侵袭和转移中可能起协同作用。

【】
  　　［1］ 周隽，吴强，杨枫. 乳腺癌中PTEN表达及其临床病理意义［J］. 临床与实验病杂志, 2003, 19(2)：162?164.

　　［2］ 林勤，庄严阵，许东坡，等. 乳腺癌中PTEN蛋白表达及其与p27kip1和cyclinD1表达的相关性［J］. 中华肿瘤杂志, 2003，25(3)：246?249.

　　［3］ 郑华川，陈颖，况立革, 等. PTEN编码产物在胃癌发生不同阶段中的表达及意义［J］. 中华肿瘤杂志, 2003, 25(4): 13?16.

　　［4］ 孙红，李明众，韩军. E?cadherin与肿瘤侵袭转移的研究进展［J］. 陕西肿瘤医学, 2001，9(1): 62?63.

　　［5］ 刘琳, 熊永炎, 田素芳. VEGF与MMP?2在胃腺癌组织中的表达及其与肿瘤侵袭转移的相关性研究［J］. 肿瘤防治研究, 2004, 31(1): 14?16.