两种主要还原性药物对血糖测定的影响

                作者：孙国林，周昭勤，朱联生

【关键词】  维生素C；还原型谷胱甘肽；葡萄糖氧化酶过氧化物酶法；电极法

　　［摘  要］ 目的：探讨维生素C(Vc)、还原型谷胱甘肽(GSH)对葡萄糖氧化酶过氧化物酶(GOD)法,电极法测定血糖的影响。方法：用GOD法、电极法分别测定加入不同浓度的Vc、GSH混合血清，对其结果进行分析、比较。结果：Vc、GSH对GOD法有显著负干扰作用,测定值与干扰物浓度成负相关关系，相关系数r分别为：-0.838 9、-0.969 4、-0.996 5、-0.994 4。其中Vc的干扰作用大于GSH，当Vc浓度达到4 000 mg/L时，影响度超过95％，血糖值甚至测不出来，而电极法则不受Vc、GSH影响,t检验P>0.05,前后无差别。结论：在用GOD法测定血糖时，应考虑药物的干扰，电极法则能有效排除这些干扰，当血糖值过低时，采用两种不同方法进行测定，可有效区分真性低血糖与假性低血糖。

　　［关键词］ 维生素C；还原型谷胱甘肽；葡萄糖氧化酶过氧化物酶法；电极法

　　Influence of Two Main Deoxidizing Medicament on Deter Mining Blood Glucose

　　Abstrcact: Objectives To explore the influence of VitC, glutathione(GSH) on GOD method, electrode method for deter mining blood Glucose . Methods Mixed sera whichhad been added differ concentration of VitC, GSH were deter mined by GOD method and electrode method respectively at the same time. Analyzing and comparing the result. Results VitC, GSHhave a significant negative interference on GOD method. deter mining valuehave negetive relation with concentration.The related coefficients(r) are -0.838 9、-0.969 4；-0.996 5、-0.994 4. VitChas more influence than GSH, when VitC concentration reaches 4 000mg/L,The influence grade exceeds 95%. Blood glucose value canhardly be detected. But VitC and GSH have no effect on electrode method. ttest P>0.05. no distinction.Conclusions We shouldhave to consider the medical influence when we take GOD method to deter mine blood glucose. Eelectrode method can exclude these interference effeciently. If blood glucose is low excessively, adopting two differ method to deter mine can distinguish untruehypoglycemia with truehypoglycemia.

　　Key words: VitC;GSH ; GOD method ;Electrode method
   
　　随着人民生活水平的不断提高，糖尿病的发病率呈上升趋势，对糖尿病的诊断和最重要的是经常进行血糖监测，以血糖浓度为依据通过饮食、口服药物或注射胰岛素等方法进行血糖控制。血糖测定的方法有葡萄糖氧化酶(GOD)法、己糖激酶(HK)法［1］、葡萄糖氧电极法、干化学试纸法等多种，其测得结果同时也受多种因素影响。本文现就GOD法、葡萄糖氧电极法在测定血糖时受到临床上常用的两种主要还原性药物维生素(Vc)和还原型谷胱甘肽(GSH)的影响做一试验，以观察Vc和还原型GSH对GOD法、葡萄糖氧电极法的影响。

　　1  资料和方法

　　1.1  资料

　　1.1.1  仪器  美国贝克曼库尔特公司BeckmanCoulter Synchron CX9全自动生化分析仪。

　　1.1.2  试剂  电极法：由美国贝克曼库尔特公司提供原装专用GLU试剂(批号：m510209)、定标液Cal1/2/3(批号：1102224、0102195、1102085)。GOD法：由浙江东瓯生物工程有限公司提供试剂、定标液(批号2005030147)。室内质控血清LEVEL1/2/3(批号M208361、M208362、M208363)由贝克曼库尔特公司提供。

　　1.1.3  干扰物  Vc(1 g/5 ml)注射液 上海禾丰制药有限公司生产，批号5H01152。注射用还原型GSH(0.6 g)山东绿叶制药有限公司生产，批号200509161。

　　1.1.4  混和血清  取正常无溶血、无黄疸、无脂血的混和新鲜血清作为正常值血清，取血糖异常、无溶血、无黄疸、无脂血的混和新鲜血清作为高值血清。

　　1.2  方法

　　1.2.1  在BeckmanCoulter Synchron CX9全自动生化分析仪的CX3部分采用电极法，用贝克曼库尔特公司原装专用GLU试剂、定标液定标。在BeckmanCoulter Synchron CX9全自动生化分析仪的CX4部分采用GOD法，用浙江东瓯试剂，按东瓯试剂要求设置测试参数，并用其配套定标液定标。用贝克曼质控血清作为室内质控，保证两台仪器结果准确、可靠。

　　1.2.2  干扰物配制  将Vc(1 g/5 ml)2 ml用蒸馏水2 ml配比稀释至1∶128共8个浓度梯度的Vc干扰液；同样将0.6 g还原型GSH用蒸馏水3 ml溶解后，取2 ml用蒸馏水2 ml倍比稀释至1∶128共8个浓度梯度的GSH干扰液。

　　1.2.3  干扰血清配制  将正常值、高值混和血清每份平均分成8份，450 μl/份，分别加入上述不同浓度的Vc干扰液10 μl，形成Vc浓度分别为：4 000 mg/L、2 000 mg/L、1 000 mg/L、500 mg/L、250 mg/L、125 mg/L、62.5 mg/L、31.3 mg/L的Vc干扰血清，用血清加蒸馏水作为对照血清；同样步骤配制GSH干扰血清。

　　1.2.4  将对照血清和干扰血清分别在CX9全自动生化分析仪的CX3部分和CX4部分上进行血糖测定，每份血清分别测定3次，取平均值。分析两种药物分别对两种方法的干扰。影响度＝(加入干扰物血清测定值-未加入干扰物血清测定值)/ 未加入干扰物血清测定值×100％。

　　2  结果

　　Vc和GSH对GOD法测定血糖有明显的负干扰作用，干扰的程度随着药物浓度的增加而增加，相关系数r分别为：-0.838 9、-0.969 4和-0.996 5、-0.994 4，其中Vc的干扰作用大于GSH，当Vc浓度≥4 000 mg/L时，影响度≥95％，血糖值甚至测不出来。同一浓度的药物对两种血清影响也有所不同，对正常值的影响度稍高于高值。而当Vc浓度＜31.3 mg/L、谷胱甘肽浓度＜250 mg/L时，影响度＜5％，几乎不影响，见表1、表2。两种药物对电极法测定血糖没有干扰，经t检验，P>0.05，加入药物前后无差别。见表3、表4。

　　表1  不同浓度Vc对GOD法的干扰血清　略

　　3  讨论

　　通过本试验可以看出Vc和GSH对GOD法测定血糖有显著的负干扰作用，浓度越高，干扰越大，当Vc浓度达到4 000 mg/L时，血糖几乎测不出。其机制为：Vc和GSH不仅和GOD法第一步反应中产生的H2O2发生反应，使H2OM2的量减少，而且还原第二步反应中形成的红色醌类化合物，使反应液颜色减弱，吸光度下降。这些也可以从CX4上连续的吸光度变化曲线得以直观表现：起初吸光度在低水平停留一段时间，然后逐渐增加，最后又下降，呈抛物线状。谷胱甘肽对血糖的影响程度小于Vc，当GSH、Vc浓度分别小于250 mg/L、31.3 mg/L时则影响不明显，而电极法采用氧消耗速率法：葡萄糖+O2+2H2O葡萄糖氧化酶葡萄糖酸+2H2O2氧量的减少可由氧电极测出，从而出样品的葡萄糖浓度。电极膜上接上生物酶后,更增加测定的专一性,使测定稳定、可靠, 即使Vc、GSH浓度达4 000 mg/L也不受其影响，P>0.05，结果显示无差别。Vc作为心血管疾病药物在临床上经常使用，其影响血糖测定也屡有报道［2］。GSH是人体内重要的生物活性分子,在维持组织细胞的生命活动、抗损伤及各器官代谢调节中起着重要的作用，也时常被较大剂量使用［3］，同时GOD法作为血糖测定的常用方法，以其结果特异、稳定和试剂价格低廉，仍广泛应用于各临床试验室。我们在实际工作中用GOD法测定血糖时，常遇到测得的血糖值很低，有时只有零点几，甚至检测不出来。这其中原因很多，有的是血样被稀释，有的是测定仪器出现了问题，有的是真性低血糖，有的则是受到还原性药物如Vc、GSH等影响。前两种原因可通过观察离心后的血样和检查仪器及室内质控得以查明，而后两种原因则难以判断，这时就可以应用不同的方法进行测定，以排除干扰因素。因此在测定结果与临床症状不符的情况下，应尽可能采用不同的方法测定，或停用干扰性药物一定时间后再测定血糖，以排除干扰。

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　　［1］  叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程［M］.第2版.南京：东南大学出版社，1997：169173.

　　［2］  谢可瓦，孙莎莎，谢可呐.静脉输注维生素C影响血糖测定1例报告［J］.中华内分泌代谢杂志，2003，19(5)：417.

　　［3］  吴伟，周成槎.还原型谷胱甘肽对肝癌介入治疗造成肝功能损害的预防作用研究［J］.肿瘤临床与康复，2001，8(4)：3940.