大鼠原位肝移植模型制备方法的改进

【摘要】  目的 改进二袖套法制备大鼠原位肝移植模型的方法。 方法 120只大鼠行原位肝移植,在原二袖套法基础上改进切取供肝方法,二针法缝合供、受体肝上下腔静脉,出血点行热止血。 结果 大鼠原位肝移植手术时间缩短,手术成功率96.7%,3周存活率94.2%。 结论 改进的大鼠原位肝移植方法手术时间短,成功率高,稳定可靠。

【关键词】  肝移植; 疾病模型,动物; 移植,同种

    ABSTRACT:  Objective  To modify the two-cuff technique in rat orthotopic liver transplan tation.  Methods  On the basis of the previous two-cuff-technique, 120 cases of rat orthotopic liver transplantation were performed with modification of fast resecting the donor liver, two-stitch suturing suprahepatic inferior vena cavum and stoping bleeding with hot pin and so on.  Results  The time of operation was reduced, the 24 hours and 3 week survival rates were 96.7% and 94.2% respectively.  Conclusion  The modified methods shorten the operation time in rat orthotopic liver transplantation.  It can enhance the stability and increase survival rate of rat orthotopic liver transplant models.

    KEY WORDS:  liver transplantation; disease models,animal; transplantation,homologous

    Kamada创建的二袖套法大鼠原位肝移植术是目前大鼠原位肝移植术中最常用的术式,该术式用套管重建肝下下腔静脉和门静脉,内支架管重建胆管,肝上下腔静脉直接吻合［1］。笔者于2006年1月-2007年1月在二袖套法基础上采用改进切取供肝等方法进行大鼠原位肝脏移植,建立稳定的大鼠原位肝移植模型,报告如下。

    1  材料和方法

    1.1  材料及动物  健康雄性SD大鼠240只［福建医科大学实验动物中心,许可证号:SCXK(闽)2004-0002］。体质量(250±30)g,术前12 h禁食,不禁水。分别采用7号和5号动脉鞘导管自制肝下下腔静脉、门静脉袖套,胆道支架采用一次性硬膜外导管。双人双目手术显微镜(XTS-6A型,成都科技医疗器械成套公司)。5-0、9-0医用无损伤缝合针线(宁波医用缝线厂)。

    1.2  方法

    1.2.1  供体手术与供肝修整  持续半开放式乙醚吸入麻醉。阴茎背静脉注射肝素生理盐水1 mL(50 U/mL)。剑突下3 cm横切口入腹,离断镰状韧带,9-0丝线结扎左膈下静脉。游离第一肝门,在胆总管分叉下方1 cm处剪开胆总管,置入内支架导管并结扎固定,近门静脉处9-0丝线结扎幽门静脉,游离尾状叶,5-0丝线结扎并切断肝食管支。游离肝下下腔静脉,直接从肝后用弯钳套5-0丝线附带脂肪结缔组织结扎右肾上腺静脉,结扎右肾静脉。游离腹主动脉腹腔干上方约1～2 mm,预置1号丝线暂不结扎。游离髂动脉分叉上方的腹主动脉并留置针插管,助手结扎腹腔干上方腹主动脉(图1A),同时重力法(40 cm高度)持续滴注乳酸林格液(0～4 ℃,45滴/min),立即用0～4 ℃生理盐水冲洒肝脏表面,使供肝迅速进入冷缺血状态。于近胸骨处剪开膈肌,剪断胸腔内的下腔静脉,先开放肝上下腔流出道,使深红色的部分灌注液留滞胸腔(图1B);在左肾静脉上缘剪断肝下下腔静脉,开放肝下下腔静脉流出道。近膈肌环处离断并提起肝上下腔静脉,离断肝周韧带(图1C),尽量不翻动、挤压肝脏,待供肝成土黄色时,于脾静脉分叉处离断门静脉,剪断肝总动脉,于远端离断右肾静脉和右肾上腺静脉,取下肝脏放入0～4 ℃乳酸林格液中,参照Kamada法［1］分别给肝下下腔静脉和门静脉安装自制袖套管。

    1.2.2  受体手术  麻醉同供体。正中纵切口入腹,离断镰状韧带及左三角韧带,游离、结扎左膈下静脉(待下肝时,于结扎线远端切断),游离肝尾状叶,5-0丝线结扎切断肝食管交通支。在右肾静脉上方游离肝下下腔静脉,直接从肝后用弯钳套5-0丝线附带脂肪结缔组织结扎右肾上腺静脉,只扎不断,作为肝下下腔静脉后壁的一个固定点以方便套管。游离胆总管并靠肝门切断,游离、结扎、切断肝固有动脉远端。在幽门静脉水平上方游离门静脉。微血管夹依次阻断肝下下腔静脉及门静脉。门静脉穿刺注入生理盐水2 mL驱血,显微血管钳迅速阻断肝上下腔静脉后近肝离断,在左右门静脉分支处剪断门静脉,再近肝剪断肝下下腔静脉,移去原肝。翻转显微血管钳使受体肝上下腔静脉断端朝向偏上,将供肝原位放入受体肝床,右侧缝一针固定，左侧一针法连续外翻吻合肝上下腔静脉,缝合最后2针前生理盐水冲洗血管腔排气。放出受体门静脉部分高凝血,含肝素生理盐水冲洗供、受体门静脉以减少血栓形成。套管法吻合门静脉,移去门静脉血管夹,同时迅速移去钳夹肝上下腔静脉的显微血管钳,结束无肝期。同法吻合肝下下腔静脉后开放恢复血流(图1D)。将胆总管支架管插入受体胆总管管腔内9-0丝线结扎固定。创面渗血处予以大头针针帽酒精灯烧热后热止血,检查无活动性出血后关腹。灯烤复温,禁饮4 h后自由进水,术后12 h自由进食。术后未用抗生素。    A:腹主动脉阻断和灌注同时进行; B:大部分灌注液滞留胸腔; C:提起肝上下

    热缺血时间<1 min,各主要操作步骤时间（中位数）:供体手术20 min,供肝修整3 min,肝上下腔静脉吻合9 min,门静脉重建3 min,无肝期15 min,肝下下腔静脉重建3 min。术后24 h内死亡(手术死亡)4只:麻醉意外、气栓各1只,因门静脉袖套滑脱出血死于失血性休克1只,因肝上下腔后壁出血而死于失血性休克1只。手术成功率96.7%(116/120)。术后死亡3只，1只第3天死于呼吸道感染,1只第7天死亡原因不明,1只第9天死于胆道梗阻。死亡原因均由尸解证实。3周生存率94.2%(113/120)。

    3  讨  论

    对于大鼠肝移植模型的研究主要是在熟练的显微手术操作基础上简化手术操作、缩短无肝期和总体手术时间、提高生存率等方面［3-4］。大鼠无肝期最长不能超过26 min［5］。笔者采取快速切取供肝方法,其特点:(1)非传统开胸阻断,精简取肝步骤;(2)阻断与灌注同时进行,减少热缺血时间;(3)大部分供肝内血液及部分灌注留滞胸腔,利于腹腔内视野清晰,便于手术操作;(4)最大限度减少翻动、挤压供肝;(5)灌注时离断肝周韧带,提高取肝效率;(6)无膈肌环的供体肝上下腔静脉,明显缩短修肝时间,且避免供、受体肝上下腔静脉吻合时进针困难,进一步缩短无肝期。

    在供肝植入前,笔者采用大头针针帽酒精灯烧热后点烫肝后及膈面的渗血点止血,甚至细小的右膈静脉亦可点烫止血,而免于缝扎;由于供肝植入后凝血功能未能立即恢复,这些渗血可能是术后出血原因［6］;如果显微镊戳伤肝脏或轻度撕裂肝脏表面,亦可采用此法,既减少术后出血机会,又缩短手术时间;在无显微凝血镊时是一种有效方法。植肝时肝上下腔静脉的吻合是决定无肝期长短的关键,笔者采用二针法缝合,可避免血管扭曲,缩短无肝期。吻合过程应注意:(1)边角的间距不宜过大,以防复流时出血;(2)受体肝上下腔静脉后壁的右膈下静脉及可能出现的小静脉开口,不可外翻至吻合口外,以免术后出血;(3)避免镊子用力钳夹血管壁而造成血管内膜的损伤;(4)勿将缝线收得过紧,以防血管狭窄;(5)缝合末冲排气泡防止气栓。

【】
  ［1］ Kamada N,Calne RY. Orthotopic liver transplantation in the rat.Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage［J］. Transplantation, 1979,28(1):47-50.

［2］ 彭方兴,郑本波,刘立新,等.大鼠原位肝移植动物模型制作要点［J］. 普外基础与临床杂志, 2005,12(2):117-119.

［3］ 程 飞,纵 滔.大鼠原位肝移植动物模型研究进展［J］. 中国医学杂志, 2005,19(2):160-162.

［4］ 董家鸿,韩本立,叶 晟.大鼠原位肝移植的显微外科技巧［J］. 中华显微外科杂志, 2003,26(1):49-50.

［5］ Kamada N,Calne RY. A surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat［J］. Surgery, 1983,93(1):64-69.

［6］ 马 毅,何晓顺,陈规划. 大鼠原位肝移植模型的手术技巧及并发症的预防［J］. 中华显微外科杂志, 2003,26(1):45-47.