院内感染革兰阴性杆菌ESBLs检测及耐药分析
【摘要】 目的 监控革兰阴性杆菌超广谱β?内酰胺酶(ESBLs)的耐药特征，为产ESBLs细菌的提供依据。方法 用双纸片协同试验检测116株大肠埃希菌和85株肺炎克雷伯菌产ESBLs的情况，并用K?B纸片扩散法对其耐药性进行检测。结果 产ESBLs大肠埃希菌为36株,阳性率为31.0%；产ESBLs肺炎克雷伯菌为27株，阳性率为31.8%；ESBLs阳性株均对亚胺培南敏感，对多种抗生素的耐药率高于ESBLs阴性株。结论 吉林地区革兰阴性杆菌ESBLs的检出率高并呈多重耐药性。临床治疗中应严格掌握抗菌药物应用指征,并动态监测其耐药性变迁，防止产ESBLs菌株的局部流行。
【关键词】 肠埃希菌；肺炎克雷伯菌；ESBLs；抗菌药物；耐药性
超广谱β?内酰胺酶(Extended?spectrum β?lactamases,ESBLs)是由质粒介导的一类能够水解甲氧亚氨基β?内酰胺类抗生素以及单酰胺类抗生素的β?内酰胺酶［1］。自1983年德国首次报道产ESBLs菌株以来，国内外不断有检出产ESBLs菌的报道。本研究检测了吉林地区2006年8月～2007年2月住院患者标本中分离出的116株大肠埃希菌和85株肺炎克雷伯菌产ESBLs情况，并应用K?B纸片扩散法检测其对多种抗生素的耐药性，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料来源
采集吉林地区2006年8月～2007年2月住院患者标本，经VITEK60型全自动细菌分析仪鉴定，其中116株大肠埃希菌（痰标本37株，尿标本37株，伤口分泌物42株），85株肺炎克雷伯菌（痰标本42株，分泌物43株）。质控菌株为大肠埃希菌(ATCC 25922)和肺炎克雷伯菌（ATCC 700603）。
1.2 试 剂
亚胺培南、阿莫西林/棒酸、头孢吡肟纸片(英国Oxiod公司)；阿米卡星、庆大霉素、环丙沙星、氧氟沙星、氨曲南、氨苄西林、哌拉西林、头孢他啶、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢呋新、头孢曲松、头孢哌酮?舒巴坦、哌拉西林?三唑巴坦、复方新诺明抗生素纸片(药品生物制品检定所)；M?H琼脂(中科院上海昆虫科技开发公司)。
1.3 方 法
双纸片协同试验：按照《全国临床检验操作规程》制备菌液，在M?H琼脂上涂拭好受试菌后，在平板中央贴上阿莫西林/棒酸纸片，再于该复合纸片四周贴上每片30 μg的头孢他啶、头孢噻肟、头孢三嗪和氨曲南纸片，各纸片中心距复合纸片中心20～30 mm，35℃孵育18～20 h后，任何一张药敏纸片在近复合纸片一侧出现协同现象，均判为ESBLs阳性。
药敏试验：采用K?B纸片扩散法，按照2002年NCCLS标准执行。以上操作过程分别用大肠埃希菌ATCC 25922和肺炎克雷伯菌ATCC 700603作阴性和阳性对照，进行定期质控。
2 结 果
从临床各类标本中分离出的大肠埃希菌116株，ESBLs阳性株36株，阳性率为31.0％；肺炎克雷伯菌85株，ESBLs阳性株27株，阳性率为31.8%。15种抗生素对大肠埃希菌产ESBLs与不产ESBLs组大肠埃希菌的耐药性比较见表1。
3 讨 论
由于第三代头孢菌素在临床的广泛应用，对其耐药的细菌不断增加，ESBLs则是目前认为肠杆菌科细菌对头孢菌素耐药的主要机制。ESBLs是在广谱酶表1 201株临床分离菌株对常用抗菌药物的耐药性分析**与ESBL s+相比，P＜0.01
如TEM?1、2或SHV?1结构基础上经个别或几个氨基酸突变衍生而来,其编码基因位于质粒并通过质粒传播,是一种可以水解青霉素类、头孢菌素类及单环类抗生素的β?内酰胺酶［1］。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是产生ESBLs最常见的革兰氏阴性杆菌。
本实验共分离2006年8月～2007年2月院内感染的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌菌株分别占31.0%和31.8%，高于国内张秋桂的报道［2］，可能与地域性差异及用药习惯不同有关。药敏试验结果表明,ESBLs阳性菌株呈现多重耐药,除对氨曲南、氨苄西林、哌拉西林、头孢呋新、头孢曲松高度耐药外，对复方新诺明、氧氟沙星、环丙沙星、庆大霉素等抗生素也有较高的耐药率。这与ESBLs编码质粒携带氨基糖苷类、喹诺酮类等抗菌药物的耐药基因有关,因而产ESBLs菌株可表现为多重耐药［3］。ESBLs阳性菌对除亚氨培南以外的多种抗生素耐药率均明显高于ESBLs阴性菌，差异有统计学意义（P＜0.005)。在63株产酶菌株的药敏检测中,未发现对亚胺培南耐药的菌株，对加酶抑制剂类复合抗生素如头孢哌酮?舒巴坦、哌拉西林?三唑巴坦也较敏感。因此，ESBLs阳性菌引起的感染,应首选亚胺培南或加酶抑制剂类复合抗生素。
产ESBLs菌的质粒可以通过接合、转化和转导等形式产生耐药基因在细菌间扩散，造成严重的院内交叉感染和耐药菌的扩散。研究本地区院内感染革兰氏阴性菌中ESBLs的产生情况及其对多种抗生素的耐药情况，有利于指导临床医生合理使用抗生素，预防ESBLs引起的院内感染的暴发流行。
【】
［1］ 高昆.产超广谱β?内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测和耐药性分析［J］.中华医学检验杂志，2005，20（4）：376?377.
［2］ 张秋桂.产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药分析［J］.中华感染学杂志，2007，17（4）：457?458.
［3］ Kader A A,Kumar A.Prevalence and antimicrobial susceptibility of extended?spectrum beta?lactamase?producing Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae in a general hospital［J］.Ann Saudi Med,2005,25(3):239?242.
