结肠腺癌组织中Survivin蛋白表达及其临床意义
作者：王诚 刘喜波 茹国美 王松祥 陈洪亮
Survivin是近年发现的凋亡抑制蛋白［１］，通过抑制细胞凋亡而与肿瘤发生有关［２］，作者采用免疫组织化学方法检测结肠腺癌以及正常结肠黏膜组织Survivin蛋白的表达，探讨Survivin蛋白的异常表达与结肠腺癌分级、分期的生物学行为关系。现将结果报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集本院1998至2000年有完整资料的结肠腺癌手术标本74例，男41例，女33例；年龄30～78岁，平均54岁。病理组织学分级：高分化腺癌16例、中分化46例、低分化12例。按Dukes临床分期：DukesA、Ｂ期30例，C、D期44例。取非结肠癌患者结肠黏膜10例作对照。采用调查表法进行随访，均获得随访结果。
1.2 方法
组织用10%中性福尔马林固定、石蜡包埋、4μm切片，Survivin抗体（克隆系4F7，产品编号ZM-0458）及免疫组化试剂盒（PicTure二步法，产品编号PV-9000），用已知Survivin阳性的结肠癌切片作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液（PBS）替代第一抗体作为阴性对照。
1.3 结果判定
双人双盲法观察免疫组化切片，选取至少5个代表性高倍视野，不少于1000个细胞，对免疫组化结果进行评估。Survivin阳性染色定位于细胞核或细胞质中，呈棕黄色。按阳性细胞数量和显色强度分为三级。弱阳性（＋）：阳性细胞数＜10%，显色强度为淡黄色或仅个别细胞呈棕黄色；强阳性（?）：阳性细胞数＞60%，多数细胞呈黄色或棕黄色；中度阳性（?）：阳性细胞数10%～60%，显色强度介于弱阳性和强阳性之间。无阳性细胞表达为阴性。
1.4 统计学处理
采用χ2检测，或等级资料Ridi分析。
2 结果
2.1 Survivin蛋白在结肠腺癌和正常结肠黏膜中的表达
74例结肠腺癌组织中有37例呈不同程度的阳性反应，阳性表达率为50%。正常结肠黏膜未见表达，二者比较有统计学意义(P<0.01)。
2.2 Survivin蛋白表达率、表达强度与结肠腺癌分级、分期关系
Survivin蛋白表达强度随着结肠腺癌病分级的增高，临床分期的变晚而增强，肿瘤分化越差，临床分期越晚，表达强度越强，见表1。表1 Survivin蛋白表达率、表达强度与结肠腺癌分级、分期关系（略）
2.3 随访结果
74例结肠腺癌患者中死亡者均为死亡，后生存年限>5年 46例，12例Survivin蛋白表达阳性，阳性表达率为26.09%；生存年限<5年28例，25例Survivin蛋白表达阳性，阳性表达率为89.29%，二者之间阳性表达率差异有显著性(P<0.01)。Survivin蛋白表达阴性的37例中，30例生存年限>5年，仅有7例生存年限<5年(图1)。
3 讨论
Survivin是新近克隆的凋亡抑制基因，属于凋亡抑制蛋白家族，是迄今发现最强的凋亡抑制因子［１］，Survivin过度表达使细胞失去了正常增殖周期中凋亡“开关”（check-point）限制，造成细胞增殖增加，凋亡减少，细胞增殖和凋亡平衡打破，导致癌症发生［３］。本资料分析显示，分化好的与分化差的结肠腺癌之间，临床分期早的与分期晚的结肠腺癌之间，Survivin阳性表达率差异有显著性。肿瘤分化越好，Survivin表达阳性率越低且表达强度弱；肿瘤分化越差，Survivin表达阳性率越高且表达强度强，并随着Dukes临床分期的由早到晚，Survivin阳性率和表达强度有递增的趋势，这表明Survivin表达与结肠腺癌分化程度成负相关，与结肠腺癌临床分期成正相关。原因可能是由于Survivin特异地表达于细胞周期G2-M期，通过与细胞有丝分裂纺锤体的微管结合，参与对细胞基因的转录调节使肿瘤细胞异常增殖和分化程度降低［４］。另外，Survivin也是血管形成中心生长因子诱导的保护性基因，能够维持血管内皮细胞的正常增殖，参与肿瘤血管的形成过程［５］。同时，通过观察Survivin表达与病理组织学分级各项指标对比发现，肿瘤细胞异型性越明显，核分裂像越多，Survivin表达就越强。对照随访5年生存年限，生存年限<5年者Survivin蛋白阳性表达率比生存年限>5年者明显增高，提示Survivin蛋白在结肠腺癌组织中高表达会促进癌细胞的转移，缩短患者预后。
【参考】
1 Ambrosint G, Adida C, Altieri DC.A novel anti-apoptosis gene, survivin, expressed in cancer and lymphoma. Nat Med,1997,3(8):917～921.
2 Allen SM, Florell SR, Hanks AN, et al. Survivin expression in mouse skin prevents papilloma regression and promets chemical-induced tumor progression.Cancer Res,2003,163(3):567.
3 Li F, Ambrosini G, Chu EY, et al.Control of apoptosis and mitotic spindle checkpoint by survivin.Nature,1998,396(6711):580.
4 Bao R, Connolly DC, Murphy M, et al. Activation of cancer gene specific gene expression by the survivin promoter.J Natl Cancer Inst,2002,94(7):522.
5 O′Connor DS,Schechner JS, Adida C,et al.Control of apoptosis during angiogenesis by surviving express in endothelial cell. Am J Pathol,2000,156:393～398.
