中华芦荟多糖提取方法的研究

【摘要】  　　 目的 比较中华芦荟多糖酶解醇沉法和酸解醇沉法提取物中芦荟多糖的含量。方法 采用酶解醇沉法和酸解醇沉法提取中华芦荟中的多糖。结果 采用甘露糖作参照，得回归方程为C=0.0145A-0.0171，酶解醇沉法提取相对含量为9.146 mg/ml，酸解醇沉法提取相对含量为7.232 mg/ml。结论 酶解醇沉法提取测定的中华芦荟中多糖含量高，且提取成本明显低于酸解醇沉及其他方法。

【关键词】  芦荟多糖；紫外分光光度法；酶解醇沉法；酸解醇沉法

　　芦荟，即中华芦荟，为多年生肉质草本植物，是集食用、药用、美容、观赏为一身的新兴保健植物。在民间用于解毒、便秘等已有几千年的。药理实验证明，芦荟中的活性成分具有杀菌、消炎、抗癌、促进伤口愈合、增强机体免疫力等十多种药理作用。目前，在美国、日本芦荟作为原料或添加剂已广泛应用于一些保健饮料和食品中，联合国粮农组织(FAO)把芦荟誉为21世纪人类的最佳保健品。长期以来，科研人员对新鲜芦荟的主要成分与保健功效进行了深入研究，发现了含有以芦荟素为主的有效成份80多种［1］。但目前对于芦荟的使用多见于化妆品行业，其蕴藏的巨大的药用价值还远远未被发掘出来，我们应该充分利用芦荟这一宝贵的植物资源，采用先进的技术工艺，从中提取有效成分，造福于人民。本实验有关采用酶解醇沉法［2］及酸解醇沉法提取，紫外分光光度法测定中华芦荟中芦荟多糖的含量，为评价中华芦荟的内在质量提供了依据。

    1  材料与方法

    1.1  试药及仪器  中华芦荟(中科院华北植物所提供)；纤维素酶(上海伯奥生物技术有限公司，批号：200205)；活性炭(注射规格)、无水甘露糖(+)、苯酚、浓硫酸、无水乙醇均为分析纯。仪器包括101-3型电热鼓风干燥箱(上海沪南仪器联营厂制造)；LD4-2A离心机(北京医用离心机厂制造)；搅拌机(上海南汇电讯器材厂制造)；1 000 r/min高速自控组织捣碎机(江苏省盐城市龙冈医疗器械厂制造)。

    1.2  测定方法 

    1.2.1  标准曲线的制备［3］  精密称取105℃干燥至恒重的甘露糖0.100 g置于100 ml溶量瓶中，加蒸馏水定容。从中精密量取5 ml置于50 ml容量瓶中，加蒸馏水定容。分别精密吸取0 ml、1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml、置于50 ml容量瓶中，加蒸馏水定容。分别精密吸取2 ml于试管中，加苯酚1 ml摇匀，加浓硫酸5 ml，迅速摇匀后，静置5 min，沸水水浴加热15 min，冷却至室温，分光光度法于490 nm波长处测吸收度。结果见表1。 表1  标准曲线测定的结果

    1.2.2  多糖的提取和含量测定

    1.2.2.1  粗多糖提取：取中华芦荟鲜叶，去皮取凝胶，于组织捣碎机内绞碎3 min，纱布过滤。保留滤液。①酶解醇沉法：定量量取滤液，加纤维素酶(12 mg/L)，室温消化1 h，90℃水浴加热30 min，抽滤，得滤液，加活性炭(1 mg/ml)，搅拌吸附1 h，抽滤，得滤液透析20 h，于透析液中加无水乙醇，使其乙醇终浓度为80%，沉淀12 h后，于离心机中(4 000 r/min)离心30 min，取沉淀物溶于蒸馏水中配成溶液，过滤，摇匀，定容至200 ml即得中华芦荟粗多糖溶液I。②酸解醇沉法：定量量取滤液，加活性炭(1 mg/ml)，搅拌吸附1 h，滤液加2%硫酸，回流2 h，Ba(OH)2沉淀多余硫酸，得滤液透析20 h，洗涤，于透析液中加无水乙醇，使其乙醇终浓度为80%，沉淀12 h后，于离心机中离心(4 000 r/min)30 min，取沉淀物溶于蒸馏水中配成溶液，过滤，摇匀，定容至200 ml即得中华芦荟粗多糖溶液Ⅱ。

    1.2.2.2  溶液的配制及测定：①从芦荟粗多糖溶液I、芦荟粗多糖溶液II中精密各吸取5 ml置于50 ml容量瓶中，加蒸馏水定容；②从中精密吸取5 ml置于另一50 ml容量瓶中，加蒸馏水定容；③从中精密吸取5 ml置于另一50 ml容量瓶中，加蒸馏水定容，最后从中分别精密吸取2 ml于3个试管中，加苯酚1 ml摇匀，加浓硫酸5 ml，迅速摇匀后，静置5 min，沸水水浴加热15 min，冷却至室温，分光光度法于490 nm波长处测吸收度。

    1.2.3  精密度试验  见表2。平行取6份的甘露糖和芦荟多糖溶液，苯酚-硫酸法显色后测定D值；苯酚-硫酸法用于芦荟多糖含量测定时，结果重现性良好。表2  精密度试验结果

    2  结果

    芦荟粗多糖溶液Ⅰ测得吸收度分别为1.337，1.336，1.337。求算平均吸收度为1.337，依回归方程，再乘上稀释倍数，得芦荟多糖相对含量为9.146 mg/ml。芦荟粗多糖溶液II测得吸收度分别为1.305，1.303，1.304。求算平均吸收度为1.304，依回归方程计算，再乘上稀释倍数，得芦荟多糖相对含量为7.232 mg/ml。

    3  讨论

    3.1  目前，国内外对芦荟多糖的研究较多，主要集中对美国库拉索芦荟多糖的研究，并有新产品Acemannan问世，而对中华芦荟多糖的研究较少，我们为了更好利用现有资源，对中华芦荟多糖做了提取的研究，发现提取后，得到的多糖含量明显高于有关的报道［3］。

    3.2  芦荟多糖的提取，目前主要采用水提醇沉法，我们也做了尝试，并且发现该法提取得到的芦荟多糖7.155 mg/ml低酶解醇沉法，而且考虑醇沉所需乙醇量较大，提取成本明显增加。因此，我们还是采用酶解醇沉法，从结果上看明显优于酸解醇沉法。然而提取中华芦荟多糖的最佳方案有待于在原生药材、实验条件相同的情况下进一步进行多组份对比试验研究。

    3.3  采用苯酚-硫酸法测定多糖含量时，不同单糖显色反应的最大吸收波长与吸收值有一定差异。因此，选择合适的标准物质是实验关键。在现有的文献报道中，芦荟多糖的测定均以葡萄糖为标准。而芦荟多糖的主要组成单糖是甘露糖，本实验也做了甘露糖、葡萄糖和芦荟多糖的苯酚-硫酸法显色产物的吸收光谱特征比较，证明了芦荟多糖的吸收光谱与甘露糖基本一致，除了490 nm处的最大吸收峰外，在430 nm处有一个次吸收峰，而葡萄糖则无此特征。因此，本文采用甘露糖为标准测定芦荟多糖的含量，能更准确地反映真实值。

    3.4  对于甘露糖的含量测定采用的苯酚-浓硫酸法稍繁琐但比较经典，由此结果换算得中华芦荟的总糖含量为9.78%，和文献报道［4］9.37%基本相符。此外药典采用旋光法，还可以采用最佳的高效液相色谱法。我们由于仪器限制，故没有采用。

【文献】
  1 高贵珍.芦荟有效成份的药理和保健功效.安庆师范学院学报(版)，2002，8(4)：98?99.

2 王勇，王宗伟，黄兆胜，等.芦荟多糖对肿瘤化疗的增效和减毒作用研究.中药新药与临床药理，2002，13(2)：89?91.

3 陈丹，包国荣，陈卫琳.斑纹芦荟与库拉索芦荟原胶中多糖含量研究.中药杂志，1996，21(6)：359?360.

4 陈敏，邵爱娟，吴志刚，等.芦荟多糖含量的比较分析.中国中药杂志，2002，27(8)：640.