溶血对乙型肝炎表面抗原检测结果的影响
【关键词】 乙型肝炎表面抗原
摘 要 目的:溶血对乙型肝炎表面抗原测定的影响。方法:采用ELISA酶免疫一步法和二步法对照比较。结果:溶血标本采用ELISA双位点夹心一步法易产生假阳性。结论:溶血影响乙型肝炎表面抗原的测定结果，溶血标本一般不应采用一步法进行HBsAg检测。
关键词 溶血;乙型肝炎表面抗原;ELISA
溶血是临床检验中最常见的一种干扰和影响因素。除常见的红细胞破坏外，血小板、白细胞等血细胞破坏释放的某些胞内成分也可干扰或影响临床检验结果的判定。为探讨溶血血清对一步法测定乙型肝炎表面抗原结果的影响，对109例受检者非溶血和溶血血清各一份，以同一厂家同一批号试剂，分别用酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法与二步法同步检测对比，现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 标本
10例健康人、12例非乙肝患者（乙肝血清标志物二对半检测阴性者）、48例乙肝患者及39例HBsAg携带者非溶血和溶血（冰冻法使溶血）血清各一份。
1.2 试剂
国产乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（上海实业科华生物技术有限公司，批号20040218）。
1.3 方法
1.3.1 溶血血清的制备:将待测血清放置低温冰箱（-40℃）冻结20min后，取出融化，以3000r/min离心10min，分离溶血血清。 1.3.2 ELISA夹心法测HBsAg
1.3.2.1 一步法:从冰箱取出试剂盒室温放置30min，微孔反应条中每孔加入待测标本50μL，设阴阳性对照各2孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。然后每孔加入酶结合物1滴（空白对照除外），充分混匀，封板，置37℃避光孵育30min。弃孔内液体，洗板5次后拍干。每孔加显色剂A和B各1滴，充分混匀，封板，置37℃避光孵育15min，目测比色，肉眼判断结果:显蓝色为阳性（+），无色为阴性（-）。
1.3.2.2 二步法:从冰箱取出试剂盒室温放置30min，微孔反应条中每孔加入待测标本50μL，设阴阳性对照各2孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。37℃避光孵育30min，弃孔内液体、洗板5次拍干，每孔加酶结合物1滴（空白对照除外），充分混匀，封板，然后在37℃避光孵育30min，弃孔内液体，洗板5次拍干，加显色剂A和B各1滴，充分混匀，封板，37℃避光孵育15min，目测比色，肉眼判断结果:HBsAg显蓝色为阳性（+），无色为阴性（-）。
2 结果
2.1. 溶血及非溶血血清标本各109份，分别以一步法及二步法检测乙肝表面抗原，结果见表1 表1 不同方法检测溶血及非溶血血清标本乙肝表面抗原结果
2.2. 对四类不同组别溶血与非溶血标本各109份以一步法与二步法检测，结果见表2。 表2 不同组别标本一步法与二步法检测乙肝表面抗原结果（
3 讨论
由表1可见，溶血标本采用ELISA双位点夹心一步法易产生假阳性，分析其原因可能是溶血血清中含有过氧化物酶物质，同辣根过氧化物酶作用 相似，能与聚乙烯孔内预包被的抗原或抗体结合，由于一步法洗涤步骤往往难以完全洗脱，残留的过氧化物酶催化底物四甲基联苯胺显蓝色，使乙肝标志物HBsAg产生假阳性。二步法首先将血清洗掉，残留的过氧化物酶含量极微，温育过程中不会与酶结合物所含抗原与抗体结合，再经第二次洗涤，大大降低了残留的可能性，能保证结果判读无误。酶联免疫吸附法（ELISA）测乙肝表面抗原不需要昂贵的仪器设备，没有放射性污染，所以国内外普遍采用。但是二步法操作程序较复杂，操作时间较长，给实验室带来不便，因而现多采用一步法，但在简化步骤和缩短时间的同时带来了出现假阴性和假阳性的严重弊端。
由表2可见，溶血血清可使从未感染过乙型肝炎病毒（HBV）的健康人非乙肝患者以及过去或正感染HBV的乙肝患者和携带者造成乙肝标志物HBsAg假阳性，从而给临床诊断带来干扰。
溶血的原因有许多，主要有体外溶血和体内溶血两种。体外溶血可由物理因素（如机械性破坏、冰冻）化学因素（如血样接触表面活性剂）和代谢性因素（如遗传病引起的血细胞脆性增加）引起。体内溶血则可由物理因素（人工心脏瓣膜或大血管手术后）、生物因素（如恶性疟疾）和药物毒性反应等因素引起。为了排除溶血对临床检验的干扰和影响，要熟练操作，避免人为因素导致溶血的发生。因此，我们从标本、检测过程及试剂、设备、方法的选择都要做到一丝不苟，认真负责的做好每一个标本。
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