蒲薏颗粒长期毒性实验研究
作者：何迅， 李勇军，王永林，王爱民，兰燕宇，黄勇
【摘要】 目的： 观察蒲薏颗粒对大鼠长期给药可能产生的毒性反应,为临床应用提供毒依据。方法: 120只SD大鼠，随机分为蒲薏颗粒高、中、低剂量组（以生药计分别为4.8、2.4、1.2 g/kg，相当于临床人用量的50倍、25倍、12.5倍），每组30只，雌雄各半，每日灌胃2次，连续给药26周,观察大鼠的一般状况、体重、摄食量，测定给药第13、26周及停药后2周大鼠的血液生化指标，脏器系数、解剖学及病理组织学改变的情况。对照组给予等容量蒸馏水。结果: 蒲薏颗粒各组动物一般状况良好，体重增长、脏器系数、血常规、血液生化指标、解剖学和主要脏器的病理组织学检查均正常，与对照组比较无明显差异。结论: 蒲薏颗粒在临床剂量范围内毒性小，使用安全。
【关键词】 蒲薏颗粒; 药物毒性; 毒性试验； 慢性；脏器系数； 白细胞计数； 凝血酶； 血红蛋白类
［Abstract］ Objective: To observe the long-term toxicity of Puyi Granules. Methods: One hundred and twenty SD rats were randomly divided into 4 groups (30 in each group, male:female=1∶1) of which 3 groups orally received high, moderate, and low dosages (4.8, 2.4, and 1.2 g/kg of raw drug equal to 50, 25, and 12.5 times of those of human dosages) of Puyi granules respectively, and one group received saline as control. The experiment was carried out for consecutive 26 weeks, and general conditions, body weight and food intake of the animals were observed. The hematological and biochemistry parameters, organ coefficients and histomorphological figures were determined in 13 and 16 weeks of the experiment and in 2 weeks after the termination. Results: The general conditions of treated rats were normal during and after the experiment. The body weight, organ coefficients, main hemotology and biochemistry indexes of rats in treated groups were basically the same as those of the controls. The urine analysis results and organ histopathological observation showed no significant difference between experimental rats and controls. Conclusion： Puyi Granules has no immediate or delayed toxicity in long-term administration on rats with dosages within clinical range, and is safe for use.
［Key words］ Piyi granules; drug toxicity; toxicity tests, chronic; leukocyte count; thrombase; hemoglobins; organ coefficients
蒲薏颗粒系由蒲公英、薏苡仁、何首乌、灵芝等药味经提取精制而成的中药制剂，具有清热解毒，活血化瘀，补益气血的功能，用于消化道肿瘤放疗、化疗的辅助，临床适宜病证见皮肤红斑、色素沉着、脱发、恶心、呕吐、口舌生疮、精神疲惫、面色无华、舌红偏紫、舌苔薄腻、脉弦细数等热毒炽盛、血行瘀滞、气血不足者，也可用于消化道肿瘤非放疗、化疗时上述证情者[1，2]。根据中药新药长期毒性实验方法和指导原则，2005年4月~10月，观察了大鼠连续灌胃蒲薏颗粒26周及停药恢复2周的毒性反应情况， 为临床应用蒲薏颗粒的安全性提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 动物及饲养条件
健康SD大鼠120只，Ⅱ级实验动物，体重（78.48±4.17）g，雌雄各半，贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK（黔）2002－0001。试验动物进入清洁实验室后饲养1周，观察动物活动、进食、大小便均无异常后开始试验。动物雌雄分笼，每笼饲养5只。全价颗粒饲料喂养，由专人管理。动物室光照充足，通风和空调设备良好，室温18～25℃，相对湿度50%～70%，实验室按常规定期消毒。
1.2 受试药物
蒲薏颗粒浸膏粉，棕色粉末，每1克相当于生药5.2 g。成人日服用量为11.54 g（相当于生药60 g）， 贵州渝生制药有限公司提供，批号20060402，实验时蒸馏水配制成所需浓度。本品每100 ml水最大可混悬55 g粉末（总体积115 ml），混悬液浓度为48%，高剂量按1 ml/100 g使用该浓度的混悬液，中、低剂量组作相应稀释后使用。
1.3 检测试剂
生化检测试剂盒由上海科华生物工程股份有限公司及上海复星长征医学有限公司生产，血液学指标分析试剂为德国拜耳公司原装试剂，凝血试剂为法国STAGO公司配套试剂。
1.4 仪器
CELL-DYN1700全自动全血细胞计数仪（美国，雅培公司），ABBOTT-AEROSET 2000型全自动生化分析仪（美国，雅培公司），STA-R全自动血凝仪(法国，STGO公司)。
1.5 方法[3~7]
120只大鼠随机分为4组，即蒲薏颗粒高、中、低剂量组（4.8 g/kg、2.4 g/kg和1.2 g/kg）和空白对照组，每组各30只,雌雄各半。各剂量组每日上午8~9时和下午5~6时各给药1次，按10 ml/kg灌胃给药；空白对照组灌胃给予等容量蒸馏水，每日两次；每周给药6 d，给药后动物自由饮水。连续给药26周，每周称体重1次，并根据体重变化调整用药剂量。试验期内观察动物的活动、被毛、进食及大小便情况。第13周末各组取1/3大鼠(雌雄各5只)，股动脉取血检查红细胞平均血红蛋白量（MCH）、白细胞（WBC）计数、淋巴细胞计数（LYMPH）、凝血活酶时间（APTT），血清作生化指标测定，骨髓涂片备查；对大鼠作系统尸解和组织病理学检查，脏器系数。第26周末同法将各组所余动物处死1/2(雌雄各5只), 做同样处理和检查。其余动物停药并继续饲养观察2周，2周后同法处死全部动物，做同样处理和检查。
2 结果
2.1 动物一般状况
试验动物在整个试验期内被毛光亮，活动自如，大小便正常，无行为异常。口、眼、鼻无异常分泌物，未见呕吐、流涎、流泪、呼吸困难等症状，无动物死亡。
2.2 动物体重和摄食量
蒲薏颗粒三个剂量组给药后，生长发育良好，体重增加正常，与对照组比较无明显变化（P>0.05）。大鼠摄食量显示，各组动物在试验期内摄食量有所波动，但与对照组比较无显著性差异（P>0.05）。结果见图1~ 4。
2.3 血液学指标
血液指标检查结果表明，给药13周雌性高剂量组WBC有所下降,对照组(9.12±1.06）×109、高剂量组(7.37±0.99）×109;停药2周时中剂量组APTT升高,对照组(33.36±0.83)s、中剂量组(36.00±2.15）s；给药26周时，雄性高剂量组MCH有所升高，对照组（20.28±0.35)ng/L、组(23.46±2.69）ng/L；停药2周时高剂量组LYMPH下降,对照组（61.28±2.15)×109、高剂量组(58.16±1.61）×109，与对照组比较有统计学意义（P<0.05），从各组异常数据的数值分析，属正常波动，其余各项指标均未见异常。
2.4 血液生化指标
给药3个月、6个月及停药15 d，蒲薏颗粒三个剂量组及对照组，血液中天门冬氨酸转氨酶、丙氨酸转移酶、肌酐血糖、K+、Na+及总胆红素等指标检测结果与对照组比较无统计学意义（P>0.05）。
2.5 大鼠脏器系数
给药3个月、6个月及停药15 d，蒲薏颗粒三个剂量组及对照组经肉眼观察，各主要脏器心肝、脾肺、肾、脑等均未见充血、肿胀、出血、坏死、粘连等异常。内脏系数与对照组比较无明显差异。
2.6 重要脏器解剖学和组织学
对心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、肠等脏器和组织进行病理组织学检查，各剂量组大鼠组织结构均无退变、坏死、炎症反应、增生或其它异常变化。
3 讨论
3.1 蒲薏颗粒处方为民间祖传经验方，民间以汤剂入药用于噎膈病内热蕴结、血行瘀滞、气血不足的治疗，有较好疗效。由于中药汤剂存在质量不易控制、携带及服用不便等缺点，故不利于临床推广应用。根据处方药材中化学成分的理化性质，采用制剂提取技术，以药效学试验为基础，利用现代制药工艺技术，将其制成见效快，剂型稳定，安全可靠的蒲薏颗粒剂。
3.2 蒲薏颗粒的成人临床用量为11.54 g/d、即0.19 g/kg(生药1 g/kg)，本试验以1.2 g/kg、2.4 g/kg和4.8 g/kg三个剂量组, 每日两次给药（折合每日生药量12.5 g/kg，25.0 g/kg，50.0 g/kg），相当于临床成人日用量的12.5倍、25倍和50倍。连续给SD大鼠灌胃给药6个月及停药恢复15 d，各组动物被毛光亮，活动、大小便、进食与饮水正常，口、眼、鼻无异常分泌物，未见呕吐、流涎、流泪、呼吸困难等症状，无动物死亡；受试动物体重增长、摄食量、血液生化指标、脏器系数均正常，与对照组比较无显著性差异（P>0.05）；血液学及凝血指标检查结果除个别指标有所波动外，其余各项指标均未见异常，与对照组比较无显著性差异（P>0.05）；解剖学观察查心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、肠等主要脏器未发现充血、水肿、囊肿、萎缩、出血、坏死、颜色异常、粘连、硬化等异常改变，与对照组比较无明显差异；对主要脏器和组织的病理组织学检查，各剂量组大鼠组织结构均无退变、坏死、炎症反应或异常增生变化，研究结果提示蒲薏颗粒在临床剂量范围内毒性小，使用安全。
【】
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