一氧化氮与内皮素在冠心康胶囊对实验性急性心肌缺血大鼠心肌损伤保护中的作用

【摘要】  目的探讨一氧化氮(NO )和内皮素( ET) 在冠心康胶囊保护大鼠心肌损伤中的作用。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、急性心肌缺血大鼠心肌损伤模型组和冠心康胶囊组，每组10只。实验中监测各组大鼠心电、心肌酶（CK，CK?MB ，LDH）变化, 同时观察血清和心肌组织匀浆中NO和ET水平的改变。结果冠心康胶囊治疗组可显著降低心肌缺血大鼠心电图ST-T 段变化值，治疗组的心肌酶（CK，CK?MB ，LDH）水平较模型组明显降低( P＜0. 01)；血清和心肌组织匀浆中NO明显升高，而血清和心肌组织匀浆中ET含量明显降低(均P＜0. 05) 。结论 冠心康胶囊能明显减轻急性心肌缺血心肌损害,能提高血清及心肌组织的NO水平，并降低ET的水平；NO和ET的变化可能是其防治心肌损伤的重要机制之一。

【关键词】  一氧化氮 内皮素 冠心康胶囊 急性心肌缺血 心肌损伤

　　Effects of Guanxinkang Capsules on Nitric Oxide and Endothelin in Myocardium Damaged Rats Induced by Acute Myocardial Ischemia

　　Abstract：ObjectiveTo evaluate the role of nitric oxide (NO) and endothelin ( ET) in the protective effect of Guanxinkang Capsules in myocardium damaged rats. Methods30 male wistar rats were randomly divided into 3 groups, control group ( n= 10 ) , acute myocardial ischemia group ( n = 10) and Guanxinkang Capsules group ( n= 10 ) . During the experiment , electrocardiography and serum CK,CK?MB and LDH were compared among the 3 groups.The levels of NO and ET in serum , myocardium were also measured. ResultsThe rising degree of ST?T obviously decreased in acute myocardial ischemia rats treated with Guanxinkang Capsules.The levels of serum CK，CK?MB and LDH , all decreased compared with model group (P＜0. 01).In addition , the NO levels in serum and myocardium increased significantly , while the ET level in myocardium  markedly decreased compared with model group ( P＜0. 05) .ConclusionGuanxinkang Capsules can effectively ameliorate the myocardium injury  induced by acute myocardial ischemia increase NO and decrease ET. The changes of NO and ET may play a role in the pathogenesis and progress of myocardial injury.

　　Key words：Nitric oxide；  Endothelin；  Guanxinkang Capsules；  Acute Myocardial Ischemia；  Myocardium injury

    人参皂苷是人参的主要有效成分，其中人参皂苷Rg2，Rb1，Re等具有保护心肌、改善心脏功能、扩张冠状动脉、增加冠脉流量、抗心肌缺血、改善心肌梗塞等作用［1～3］。山楂叶中所含的黄酮成分具有多种药理作用，能使冠状动脉扩张，有降血脂、降血压和强心作用，能改善心脏活力和兴奋中枢神经系统的作用，且具有抗氧化自由基对血管内皮细胞（VEC）伤害的作用［4，5］。二者是冠心康胶囊的主要组成药物。本研究进一步探讨该复方对心肌缺血的治疗作用，以探讨其对心肌保护作用的可能机制。  

　　1  材料和方法

　　1.1  动物及分组 

　　健康雄性Wistar大鼠,体重(200±20) g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，适应性喂养1周后随机分成3组，即正常对照组、模型组、治疗组。

　　1.2  药物与仪器 

　　冠心康胶囊悬液：按处方比例称取中药材，按制备工艺制药［6］，用蒸馏水配成悬液（2g生药/ml）；盐酸异丙肾上腺素注射液（ISO，上海禾丰制药有限公司提供，批号010901）；乌拉坦（沪Q/HG22?771/68，批号010205，临用时用生理盐水配成20%注射液）；磷酸肌酸激酶(CK)试剂盒、磷酸肌酸激酶同功酶(CK?MB)试剂盒、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒（北京中生北控生物科技股份有限公司提供）；NO试剂盒（南京建成生物工程研究所提供）；内皮素（ET）试剂盒（人民解放军总科技开发中心放免所提供）；心电图机［（心电图（ECG）?6511型，上海光电医用仪器有限公司）］；Lisa300型全自动生化分析仪；台式高速离心机(TGL?16G)；722型光栅分光光度计（山东高密分析仪器厂）。

　　1.3   方法 

　　1.3.1  心电图检测实验用药前将各组大鼠先作心电图检查，弃去ST段、T波有异常改变者和心律失常者［7，8］，分组，每组10只，继则开始按人与大鼠体表面积换算给药量，每天分别灌胃给药，冠心康胶囊悬液（10.35 g生药/kg），模型组与正常对照组每天给以等体积蒸馏水灌胃。连续给药14 d，并且于给药第13天和14天各组动物分别以20%乌拉坦麻醉，仰位固定，皮下多点注射盐酸异丙肾上腺素。于第2次注射盐酸异丙肾上腺素后，连接心电图机，走纸速度50 mm/s，标准电压10  mm/mv，记录II导联心电图。

　　1.3.2  血清CK，CK?MB ，LDH检测采用颈静脉取血方法，将血液迅速装试管中，静置后，4℃3 000 r/min离心10 min，分离血清，按试剂盒说明进行测定血清CK，CK?MB ，LDH活性。

　　1.3.3   NO检测　

　　采用硝酸还原酶法测定血清中NO含量。

    血清NO 测定：实验结束时从下腔静脉采血,分离血清,测定NO。

    心肌组织NO 测定：动物处死后迅速取出心脏,洗净残血,剪碎,取心肌组织100 mg 置于玻璃匀浆器中加入0. 01 mol/ L  PBS 1 ml , 冰浴下匀浆,然后4℃,4 000 r/min离心15 min ,取上清, 按试剂盒说明进行测定NO水平。

　　1.3.4  ET检测　

　　动物处死后,摘取心脏,立即用预冷的生理盐水冲洗,除去血液,切取大鼠心尖部心肌组织,称重,取100 mg ,迅速放入0.1 mol/ L HAC 1 ml 略做研磨,然后在100℃水浴中煮沸10 min ,再次研磨制成匀浆,在4℃，3 000 r/min离心15 min ,取上清测定ET水平。

　　1.4  统计学处理所有数据经SPSS软件处理，采用单因素方差分析，用±s表示。

　　2  结果

　　2.1   实验大鼠心电??

　　ST（mv）指标变化情况大鼠注射ISO后S?T段均明显抬高，模型组与正常组比较差异显著(P＜0.05)，提示造模成功；且组在各不同时间段可改善心肌缺血引起的S?T段抬高，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)。结果见表1。表1  实验大鼠S?T段变化情况(略)

　　2.2  实验大鼠心肌酶学指标变化情况大鼠造成心肌缺血模型后，血清中CK， CK?MB， LDH含量较正常组显著升高(P＜0.05)。治疗组可降低心肌缺血大鼠血清CK ，CK?MB，LDH水平(P＜0.05)。结果见表2。表2  实验大鼠心肌酶变化情况(略)

　　2.3  实验大鼠血清及心肌组织匀浆中NO和ET含量变化结果见表3。表3  实验大鼠血清及心肌组织匀浆中NO和ET含量(略)

　　3  讨论

    急性心肌缺血的主要ECG特征是S?T段抬高，研究显示，通过实验比较各组大鼠S?T段的偏移程度，可以反映心肌缺血的程度并可以作为评价抗心肌缺血药物疗效的指标之一［9］。从药理实验动物造模角度来判断心电的改变(Ⅱ导联)，在ECG上可以看到大鼠心肌缺血后 T波升高、S?T段抬高，说明实验所造的模型是成功的。本实验结果表明，冠心康胶囊治疗组大鼠心电图S-T段的变化明显小于模型组。说明冠心康胶囊可明显改善心肌缺血模型组大鼠ECG的改变并抑制ISO致大鼠的S?T段抬高。大鼠在注射ISO后，模型组心肌酶显著升高，说明心肌细胞正处于变性坏死期间，有氧代谢低下，细胞出现明显损伤。而治疗组心肌酶学相关指标均有所恢复，说明该药能明显降低大鼠血清中CK，CK?MB，LDH的水平，使酶活性反应增强，说明心肌细胞有氧代谢明显强于模型组，从而减轻心肌细胞变性反应，使细胞保持较强生命力。

    血管内皮细胞（VEC）其主要功能是调节心脏、循环功能和内环境的稳定，参与全身各组织器官功能的调节。已有实验证明［10］，VEC可以产生和分泌十余种生物活性物质，是机体最大的内分泌腺，对血管舒缩功能进行调节，具有选择性渗透屏障作用，并且在抗血栓形成、血管生长及代谢等方面起重要作用。作为血管内皮活性物质，NO是目前所知最强的血管扩张因子之一，可直接作用于血管平滑肌致血管扩张，其活性与心血管疾病的发生有密切的关系。Hirona等［11］研究表明，NO可从缺乏血流或压力变化或体液刺激的离体动脉内皮中张力性释放。这种张力或基础的释放，抑制内皮下平滑肌的收缩。ET是迄今作用最强的缩血管物质，内皮细胞分泌ET是一种旁分泌方式，外周血液中ET升高提示在冠状动脉病变部位的局部ET的浓度会异常升高，从而导致冠状动脉痉挛或收缩，心肌缺血坏死，并可加重心肌损伤。本实验研究结果显示，ISO心肌缺血模型组大鼠经冠心康胶囊干预后NO水平显著升高，ET水平有所下降。说明该药通过促进心肌缺血大鼠血清NO的合成及释放，降低心肌缺血大鼠ET水平，增加冠状动脉储备能力，预防和改善心肌缺血，从而达到改善内皮细胞功能障碍，显示出良好的药效。本研究结果提示，该药可能通过增加内皮细胞合成NO，降低心肌缺血大鼠ET发挥抗心肌缺血作用。

【】
  　　［1］许 浩，葛亚坤，邓同乐，等. 人参皂苷Rb1对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的保护作用［J］.药通报，2005,21(7)：803.

　　［2］郑淑秋，郭伟芳，叶金梅，等.人参皂苷Rg2对大鼠心肌缺血再灌注损伤诱发心肌细胞凋亡的保护［J］. 中国药理学通报，2005,20(4)：480.

　　［3］陈满秋，于晓凤，曲绍春.人参Rb组皂苷对犬实验性心肌梗死的保护作用［J］.中草药，2001,32(2)：136.

　　［4］黄沛力，曾昭晖.银杏叶和山楂叶的抗氧化作用［J］.中国药学杂志，1996,5：274.

　　［5］ 叶希韵，王耀发. 山楂叶总黄酮对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用［J］.中国应用药学杂志，2002,19(4)：265.

　　［6］潘 志, 王颖航, 刘 凯. 正交试验法优选冠心康胶囊的制备工艺研究［J］.中国药品标准，2005,6(3):45.

　　［7］徐淑云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学，第3版［M］.北京：人民卫生出版社，2003：1010.

　　［8］吴建新，王一心，钮荣祥，等.心脉龙对大鼠异丙肾上腺素性缺血心肌的保护作用［J］.中国病理生理杂志，2002,18(1)：97.

　　［9］孙伟夫，李晓峰，李彩燕，等.心复康抗心肌缺血的实验研究［J］.中国中医药科技，2001,8 (5)：298.

　　［10］卢建敏.冠心病血管内皮功能失调与检测［J］.心血管病学进展，2000,21 (6)：339.