滋阴潜阳解毒通络饮对SHR左心室肥厚及心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响

【摘要】  目的：观察滋阴潜阳解毒通络饮对自发性高血压大鼠（SHR）心肌细胞外基质（Ⅰ、Ⅲ型胶原）的影响，探讨高血压左心室肥厚的中医发病机理及改善左心室肥厚的可能机制。方法：以自发性高血压大鼠为模型，分为对照组、依那普利组、中药大、中、小剂量组分别灌胃相应药物。观察左心室重量指数及心肌形态学改变，用免疫组化方法检测心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原表达。结果：16周龄SHR大鼠对照组左心室重量指数明显高于中药高、中剂量组与依那普利组。对照组心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原显著增加，而依那普利组、中药大、中剂量组均对其有抑制作用。结论：高血压左心室肥厚的中医发病机制可能与毒损心络相关。降低心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原可能是滋阴潜阳解毒通络饮改善高血压左心室肥厚机制之一。

【关键词】  左心室肥厚 滋阴潜阳 解毒通络 自发性高血压 大鼠 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原

    基金项目:吉林省科技厅项目课题(编号：20050569)    　　原发性高血压(Essential Hypertension，EH)是我国最常见的心血管疾病之一，临床表现为原因不明的体循环动脉血压持续增高，常伴有不同程度的心、脑、肾等脏器病变，约有25%-30%高血压患者合并左心室肥厚（Lefe Ventricular Hypertrophy LVH），它主要表现为左心室肥厚(LVH)、左室舒张功能减退及冠状动脉血流异常。LVH是导致心脏猝死、心肌缺血、心律失常、心力衰竭等心血管事件增多的重要因素［1］。本研究通过实验观察滋阴潜阳解毒通络饮对自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚及心肌细胞外基质（Ⅰ、Ⅲ型胶原）的影响，以阐明其作用机理，说明高血压左心室肥厚与毒损心络机理相关，为中药高血压左心室肥厚提供理论依据。

    1  实验材料

    1.1  实验动物  10周龄自发性高血压大鼠50只，雄性，体重（220±30）g，由医学院试验动物研究所提供。

    1.2  药品与主要试剂  滋阴潜阳解毒通络饮由江阴天江药业有限公司生产的单味中药浓缩颗粒组成：生地20 g，钩藤20 g，夏枯草20 g，白芍20 g，赤芍20 g，丹参20 g，黄连15 g，菊花12 g，龙胆草12 g，三七9 g，代赭石30 g，煅牡蛎30 g。批号：0107022；马来酸依那普利由扬子江药业集团江苏制药股份有限公司提供，批号：0608301。Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组化试剂盒，由博士德生物工程有限公司提供。

    1.3  主要实验仪器  BP?6动物无创血压测试仪（成都泰盟科技有限公司）。Olympus显微镜，LEICA自动脱水机，包埋机，自动切片机，秤，Olympus电子成像系统。

    2  实验方法

    2.1  分组方法  筛选血压高于140 mmHg的SHR大鼠，随机分成对照组、依那普利组、中药高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组10只。

    2.2  给药方法  各组按正常人（60 kg体重）与大鼠给药剂量折算，中药大中小剂量配成浓度为33％，16.5％，8.25％的悬液，依那普利组配成28％的悬液，空白组给予蒸馏水，各组适应性饲养1周后，按1.5 mL·100g-1体重灌胃给药5周。16周后观察以下各指标。

    2.3  主要观察项目及方法

    2.3.1  左心室重量指数  先测大鼠体重(BW)，腹腔麻醉，抽取血标本后开胸取心脏，冰冷生理盐水充分灌洗，除去大血管、心房、心外膜脂肪组织，滤纸吸干水分，称左心室湿重(LVW，含室间隔)，以左心室重/体重(LVW/BW)值为心室重量指数（LVWI）。

    2.3.2  心肌组织病理形态学观察  取左心室中部冠状切面心肌组织，常规固定、脱水，透明，浸蜡，包埋和切片，进行HE染色。

    2.3.3  检测心肌组织ColⅠ、ColⅢ  采用免疫组化法。显微镜下观察：棕黄色者为阳性，图像分析：选择200倍视野每张免疫组化片随机选5个视野，测量阳性表达的平均光密度值，再测阳性表达的面积，免疫组化指数=(阳性面积×光密度)/100。

    2.4  统计学处理  各组数据以均数±标准差(±s)表示，采用SPSS 11.5版软件进行统计分析，两组间比较用t检验，多组间比较用单因素方差分析，P＜0.05为有统计学意义。

    3  结果

    3.1  心肌组织病理形态学观察  从心肌纵切面来看，对照组可见大部分心肌纤维变粗，排列紧密，紊乱，有的可见肌纤维断裂，部分细胞核肥大。高剂量组心肌纤维大部分正常，但仍可见少部分区域肌纤维变粗，肌束内散在少量炎性细胞，少部分心肌纤维排列紊乱，粗细不等。中低剂量组差异不大，一部分心肌形态均匀，排列成束，另一部分心肌增粗，排列紊乱，有断裂现象。依那普利组有少部分心肌纤维轻度肿胀，未见纤维化及炎性细胞浸润，大部分排列整齐，无明显增大的细胞核。各组以依那普利组和高剂量组为好，二者差异不大，表明中药可明显改善高血压大鼠心肌细胞纤维化。

    3.2  各组大鼠左心室重量指数变化  见表1。表1  各组大鼠左心室重量指数表达注：与对照组比较，#P＜0.01；与依那普利组比较，△P＜0.01；与高剂量组比较，▲P＜0.05

    3.3  各组大鼠心肌Ⅰ，Ⅲ型胶原指数表达  见表2。表2  各组大鼠心肌Ⅰ，Ⅲ胶原免疫组化表达 注：与对照组比较，#P＜0.01；与依那普利组比较，△P＜0.05

    4  讨论

    　　祖国医学暂无LVH类似病名，一般认为可参照心胀。心胀之名首见于《灵枢·胀论》曰：“夫心胀者，烦心短气，卧不安。”心胀的病位在血脉与心，病变为痰饮、脂浊、瘀血互结，血脉瘀阻，心体胀大所致。疾病演变为风眩在前，心胀继后［2］。肥厚的心脏与增高的血压在新的状态下建立起相对平衡状态，这种相对平衡是阴阳失调的结果［3］。

    　　大量研究表明：心肌细胞外基质(ECM)不成比例的过度积聚，与高血压LVH的病理生理过程密切相关。心肌ECM由胶原、纤黏连蛋白、层黏连蛋白及弹性蛋白、蛋白聚糖等组成，其中主要成分是胶原。胶原基质内的主要结构蛋白为I型和Ⅲ型胶原，Ⅰ型胶原占胶原总量的85％，有较大的张力，伸展回弹性小，主要聚合成粗纤维网；Ⅲ型胶原占11％，有较大的伸展回弹性形成细纤维网，与Ⅰ型胶原纤维相伴存在，共同在维持心脏结构和功能的完整性方面起着重要作用，它有助于心肌细胞产生直接的收缩力和心室被动伸展。在生理状态下，ECM的合成与降解处于动态平衡。一旦平衡失调，降解减少和(或)合成增多，则可致间质纤维化和血管周围纤维化，导致心室肥厚。

    　　实验表明，滋阴潜阳解毒通络饮具有保护SHR大鼠心肌的作用，有效防治心肌纤维化，减少左心室重量指数，降低心肌组织I、Ⅲ型胶原表达，从而起到减轻和逆转LVH的作用。可以认为：阴阳失调，毒损心络是高血压左心室肥厚的中医发病机理之一，因此，滋阴潜阳，解毒通络法对于临床预防和逆转LVH有重要指导意义。王永炎［4］指出：主要是邪气亢盛，败坏形体即转化为毒，毒系脏腑功能和气血运行失常使体内的生理或病理产物不能及时排除，蕴积体内过多而生成。本方选生地黄、钩藤等中药组成。方中以生地黄、钩藤为君药以滋阴潜阳通络。臣用夏枯草、代赭石、煅牡蛎配合君药加强其滋阴潜阳作用；并用黄连、丹参燥湿化痰、解毒通络。佐以白芍养阴柔肝，赤芍、三七化瘀通络，菊花、龙胆草清泄肝火而加强解毒之力。诸药合用，共奏滋阴潜阳、解毒通络之功效。全方标本兼治、攻补兼施，协调脏腑阴阳、气血平衡，使瘀毒去，心络通，毒解心平。其改善左心室肥厚的机制可能与降低心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原有关，由于中药作用存在多环节，多靶点，其具体机制还有待进一步研究。

【】
  ［1］赵光胜.高血压病［M］.北京：人民军医出版社，1999：475.

［2］吴华堂，范金茹.从肝治心法逆转自发性高血压大鼠左室肥厚的实验研究［J］.中医药学刊，2003，21(1)：81.

［3］杨传华，韩玉水，刘 政.中医药逆转高血压左心室肥厚的理论探讨［J］.河北中医，1994，16(5)：1-2.

［4］王永炎.关于提高脑血管疾病疗效难点的思考［J］.中西医结合杂志，1997，17(4)：195.