洋参王浆咀嚼片的质量标准研究
【关键词】 洋参王浆咀嚼片；人参皂苷；10－羟基－△２－癸烯酸；TLC；HPLC
Studies on quality standard of american ginsing and royal jelly chewable tablets
【Abstract】 Objective To establish the quality standard of American ginsing and royal jelly chewable tablets. Methods American ginsing and royal jelly were qualitatively determined with TLC and ginsenosides Re，Rg1and Rb1 were quantitatively analysed with HPLC. Results It was show that the linear relation between injecting volume and apex area of this method was distinct(r=0.999).The average recovery rate was 101.52％，RSD was 0.51％.Conclusion The method was exact and credible and could effectively control the quality of American ginsing and royal jelly chewable tablets.
【Key words】 American ginsing and royal jelly chewable tablets；ginsenosides； 10-hydroxy-2-decylenic acid； TLC；HPLC
洋参王浆咀嚼片是新近研制开发的具有滋补强壮功能的保健食品。本品以西洋参为主，生津、降火、除烦，佐以蜂王浆增强机体新陈代谢功能，提高免疫力。为有效控制产品质量，特制定质量标准。
1 仪器和试剂
Waters2695-2996高效液相色谱仪；硅胶G和硅胶GF254(青岛海洋化工厂)；人参皂苷Re、Rg1、Rb1、F11，10－羟基－△２－癸烯酸(购于药品生物制品检定所)；洋参王浆咀嚼片自制；色谱乙腈（美国迪马）；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。
2 TLC定性鉴别
2.1 西洋参的鉴别［1］ 取本品10片，研磨成细粉，称定2g，加甲醇25ml，加热回流1h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，弃去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇提取液，用水洗涤2次，每次10ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺味西洋参的咀嚼片按上述方法制备阴性对照品。再取人参皂苷对照品Re、 Rb1、 Rg1和拟人参皂苷F11，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述六种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15:40:22:10）4℃放置12h的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光灯及紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点。结果见图1a。
2.2 蜂王浆的鉴别［2］ 取本品40片，研磨成细粉，称定10g，加乙醚40ml，超声提取60min，过滤，蒸发滤液至2ml，作为供试品溶液。另取缺味蜂王浆的咀嚼片按上述方法制备阴性对照品。再取10－羟基－△２－癸烯酸对照品加甲醇制成1ml含对照品1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸（3:1:0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的暗斑。结果见图1b。
1 人参皂苷Rg1 2 人参皂苷Re
3 样品 4 人参皂苷Rb1
5 拟人参皂苷F11 6 缺西洋参阴性对照
a 人参皂苷对照品与样品TLC图谱 1 10-羟基-2-癸烯酸 2 样品
3 缺蜂王浆阴性对照
b 10－羟基－△２－癸烯酸
对照品与样品的TLC图谱 图1 样品TLC图谱（略）
3 人参皂苷含量测定
3.1 色谱条件［3］ 色谱柱: KromasilC18(4．6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-水(82：18)；流速：1.3 ml／min；检测波长：203nm；柱温：40℃；进样量：20μl。
3.2 样品溶液的制备与测定［1］ 取本品20片，研磨成细粉，精密称定3g，置具塞锥形瓶中，精密加入水饱和的正丁醇50ml，称定重量，置水浴中加热回流提取1.5h，放冷，再称定重量，用水饱和正丁醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，并转移至10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。吸取样品20μl，注入高效液相色谱仪。结果见表1。HPLC图谱见图2。 表1 样品测定结果 （略）
3.3 线性关系考察 分别精密称取人参皂苷对照品Re、 Rb1和Rg1适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Re 0.58mg， Rb11mg和Rg10.1mg的溶液。吸取该对照品溶液5、10、15、20、30μl分别注入高效液相色谱仪。以进样量与峰面积进行线性回归，分别得到人参皂苷Re、 Rg1和Rb1的回归方程和相关系数为：Y=223140X- 8215.4，r=0.9990；Y=252342X+9573.6，r=0.9992；Y=201959X+35421，r=0.9998。结果表明，人参皂苷Re在2.8～16.8μg/ml范围内、Rg1在0.5～3μg/ml、Rb1在5～30μg/ml范围内与峰面积线性关系良好。
3．4 精密度试验 精密吸取人参皂苷Re、Rg1和Rb1对照品溶液20μl，分别进样5次，以人参皂苷Re峰面积RSD为 1.5％，以人参皂苷Rg1峰面积计算，RSD为 2.5％，以人参皂苷Rb1峰面积计算，RSD为 0.5％，表明仪器精密度好。
3.5 稳定性试验 精密吸取供试品溶液，在0、1、2、4、8、12、24h测定，计算所得人参皂苷Re的RSD为 0.3％，人参皂苷Rg1的RSD为1.6％，人参皂苷Rb1的RSD为1.3％，表明样品稳定性好。
3．6 重复性试验 取同一样品6份，按“3．2”项下的方法处理、测定，计算所得人参皂苷Re、Rg1和Rb1的RSD分别为2.8％、2.3％和0.8％。
3.7 加样回收率试验 精密称取已知含量的咀嚼片粉末约3g，共5份，加入人参皂苷Rb1适量，按样品溶液制备项下处理，测定人参皂苷Rb1含量，并计算回收率，得到人参皂苷Rb1的平均回收率为101.52%，RSD为0.51%。
3.8 阴性试验 取无西洋参的阴性样品，按“3.2”下的方法处理、测定。结果见图2。
4 讨论
本制剂是以西洋参和蜂王浆为主要成分，对西洋参中的人参皂苷和蜂王浆中的10－羟基－△２－癸烯酸TLC分析结果表明，样品与标准品相对应处斑点集中清晰，可作为该产品的定性鉴别标准。高效液相色谱法测定制剂中人参皂苷Re， Rg1和Rb1的含量，经方法学考察，结果准确、灵敏、重复性好，能够有效控制洋参王浆咀嚼片的质量。
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1 国家药典委员会编.中华人民共和国药典.一部.北京：化学出版社， 2005，107.
2 黄卫平.蜂王浆制剂质量标准研究.基层中药杂志，1996，10(3):18.
3 都晓伟，周婧.西洋参加工品西洋红参中皂苷及糖类成分的分析.中医药学报，2005，33(2):3.
