清肺口服液质量标准的研究
作者：居玲玲，文红梅，郭立玮
【摘要】 目的 建立清肺口服液的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别制剂中葶苈子、黄芩和虎杖；采用高效液相色谱方法测定盐酸麻黄碱的含量。结果 薄层鉴别能检出葶苈子、黄芩和虎杖的斑点，且斑点清晰。盐酸麻黄碱在16.41～525.0 μg/mL之间与峰面积呈良好线性关系，r=1.000,平均加样回收率为99.89%，RSD为1.42%。结论 该方法可用于清肺口服液的质量控制。
【关键词】 清肺口服液；盐酸麻黄碱；薄层色谱法；高效液相色谱法
Abstract:Objective To establish the quality standard of Qingfei oral liquor.Methods The quality of Descurainia sophia,Scutellaria baicalensis Georgi and Polygonum cuspidatum was identified by TLC. The content of ephedrine hydrochloride was determined by HPLC. Results The spots on TLC plates were clear without interference in the blank control. The liner range of ephedrine hydrochloride was 16?41~525.0 μg/mL(r=1.000). The average recovery of ephedrine hydrochloride was 99.89% and RSD 1.42%.Conclusion The method can be used for the quality control of Qingfei oral liquor.
Key words:Qingfei oral liquor; ephedrine hydrochloride; thin?layer chromatography; HPLC
清肺口服液由麻黄、葶苈子、黄芩、虎杖等中药精制而成，具有宣肺开闭、清热解毒、化痰止咳之功效，主治小儿病毒性肺炎痰热闭肺证。麻黄为君药，主要含有麻黄碱、伪麻黄碱等生物碱类成分［1］，其中麻黄碱含量较高，且为活性成分。为了更好地控制制剂的内在质量，本文建立了制剂中葶苈子、黄芩和虎杖的薄层鉴别方法及麻黄碱的HPLC含量测定方法。
1 仪器与试剂
美国Waters?515泵，Waters ?2487紫外?可见检测器，Rheodyne 进样器，中科院大连化学物理所WDL?95色谱工作站；PBQ I型薄层自动涂布器；薄层层析显色加热器；硅胶G（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国Tedia公司）；水为重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。
盐酸麻黄碱对照品（批号171241?200303，HPLC法检查纯度大于99%）、黄芩苷对照品（批号110715?200212）、大黄素对照品（批号0757?200206）、黄芩对照药材（批号120955?200406）均购自药品生物制品检定所。葶苈子药材经江苏省药检所鉴定为十字花科植物独行菜（Lepidium apetalum）的干燥成熟种子，习称“北葶苈子”；并标化后作为对照药材使用。清肺口服液(南京中医药大学研制，批号：050914，050915，050916)。
2 薄层鉴别
2.1 黄芩［2］ 取清肺口服液1 mL，加甲醇2 mL，摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液。取缺黄芩阴性制剂1 mL,同法制成缺黄芩的阴性制剂溶液。另取黄芩苷对照品，用甲醇制成每1 mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。取黄芩对照药材1 g，加甲醇20 mL，超声处理20 min,滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶液1 mL使溶解，即得，作为黄芩对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005版一部附录ⅥB）试验，吸取上述4种溶液各5 μL，分别点于同一以含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯?丁酮?甲酸?水(体积比5∶3∶1∶1)为展开剂，预平衡30 min，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同的暗绿色斑点；缺黄芩的阴性制剂无干扰。见图1。
1.缺黄芩的阴性制剂; 2.黄芩对照药材; 3.黄芩苷对照品; 4-6.清肺口服液
图1 清肺口服液黄芩薄层色谱图（略）
Fig.1 TLC chromatogram of Scutellaria baicalensis Georgi
2.2 虎杖［3］ 取清肺口服液10 mL，加2.5 mol/L硫酸溶液10 mL，水浴加热30 min，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次5 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取虎杖对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1 mL含各1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005版一部附录ⅥB）试验，吸取上述4种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60 ℃）?甲酸乙酯?甲酸(体积比15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。见图2。
1.虎杖对照药材; 2.大黄素对照品; 3.大黄素甲醚对照品; 4-6.清肺口服液
图2 清肺口服液虎杖薄层色谱图（略）
Fig.2 TLC chromatogram of Polygonum cuspidatum
2.3 葶苈子［4］ 取清肺口服液10 mL，置分液漏斗中，加水饱和正丁醇10 mL振摇提取，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺葶苈子阴性制剂1 mL,同法制成缺葶苈子的阴性制剂溶液。再取北葶苈子对照药材粉末1 g，加甲醇10 mL，密塞，浸泡24 h，超声处理20 min，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005版一部附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和正丁醇?冰醋酸?水(体积比9∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同蓝色荧光斑点。缺葶苈子的阴性制剂无干扰，见图3。
1.缺葶苈子的阴性制剂;2.葶苈子对照药材;3-5.清肺口服液
图3 清肺口服液葶苈子薄层色谱图（略）
Fig.3 TLC chromatogram of Descurainia sophia
3 含量测定
3.1 对照品溶液的制备 精密称取于五氧化二磷干燥器中干燥6 h的盐酸麻黄碱对照品适量，用流动相制成每1 mL含0?1 mg的溶液，即得。
3.2 供试品溶液的制备取清肺口服液5 mL，置分液漏斗中，加5%（质量分数）氨水10 mL，摇匀，用三氯甲烷振摇提取4次（10×2，5×2 mL）合并三氯甲烷液，用5%（质量分数）氨水5 mL洗涤以去除杂质，水层用三氯甲烷5 mL振摇提取1次，合并三氯甲烷液，用0.05 mol/L盐酸溶液振摇提取3次（10，5，5 mL），提取液置25 mL量瓶中，用10%（质量分数）氢氧化钠溶液调pH至4，加水稀释至刻度，即得。
3.3 色谱条件与系统适应性试验色谱柱：Lichrospher C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈?水?三乙胺?磷酸（体积比5∶95∶0.05∶0.1）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：210 nm。理论塔板数按盐酸麻黄碱应不低于3 000。
3.4 线性关系考察 精密称取于60 ℃干燥至恒重的盐酸麻黄碱对照品10.50 mg，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成盐酸麻黄碱标准贮备液（1.050 mg/mL）。分别配成525.0、262.5、131.3、65.63、32.81、16.41 μg/mL的系列对照品溶液，分别吸取上述溶液20 μL，注入液相色谱仪，测定，以峰面积（A）为纵坐标，对照品质量浓度（ρ）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A＝2.098×104ρ-27 840.877，r＝1.0000。表明盐酸麻黄碱在16.41～525.0 μg/mL之间与峰面积呈良好的线性关系。
3.5 空白试验原方去除麻黄药材，按制剂工艺制备缺麻黄的阴性制剂。取阴性制剂5 mL，置分液漏斗中，按含量测定方法分析，空白样品色谱在盐酸麻黄碱相应保留时间上没有干扰峰。见图4。
A.缺麻黄的阴性制剂; B.盐酸麻黄碱对照品;C.清肺口服液 1.盐酸麻黄碱
图4 HPLC色谱图 （略）
Fig.4 HPLC chromatogram
3.6 稳定性考察 取同一批号（050914）制剂，每隔2 h进样1次，共测6次，结果峰面积RSD=0.67%，表明供试品溶液在12 h内稳定。
3.7 重复性试验 取同一批号（050914）制剂5份，分别按照供试品溶液制备方法制备，依法测定，盐酸麻黄碱的平均含量为0.426 1 mg/mL,RSD=1.93％。
3.8 加样回收率试验 取已知盐酸麻黄碱含量的制剂样品(批号：050914，含量: 0.426 1 mg/mL)，进行加样回收率试验。取本品2.5 mL，共6份，分别加入1.050 mg/mL盐酸麻黄碱对照液0.8、0.8、1.0、1.0、1.2、1.2 mL置分液漏斗中，按“3.2”项方法制备供试品溶液，依法测定，并计算盐酸麻黄碱回收率为99.54％，RSD=2.90％，结果见表1。
表1 盐酸麻黄碱回收率试验（略）
Tab.1 Recovery test of ephedrine hydrochloride
3.9 制剂样品测定 3批制剂样品，如法测定，根据外标一点法计算样品含量，结果见表2。
表2 盐酸麻黄碱的含量测定结果（略）
Tab.2 Content of ephedrine hydrochloride in the sample
4 讨论
4.1 由于测定波长处于末端吸收附近，以乙腈?水系统为流动相，基线噪音较小，但由于麻黄碱为生物碱成分，需加入缓冲体系进行色谱分析，经试验研究表明，在乙腈?水?三乙胺?磷酸（体积比5∶95∶0.05∶0.1）(pH3)的条件下，可使盐酸麻黄碱呈现良好分离。故选乙腈?水?三乙胺?磷酸（体积比5∶95∶0.05∶0.1）为流动相。
4.2 麻黄碱为清肺口服液的活性成分，可用来作为中成药的定量指标成分。
4.3 该方法简便可靠，精密度高，分离度好，可用于清肺口服液的含量测定和质量控制。
【】
［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草精选本（下册）［M］.上海:技术技术出版社，1998：1685.
［2］ 黄江虹.定喘汤加减方颗粒中麻黄和黄芩TLC鉴别［J］.国际医药卫生导报，2006，12(24):78-79.
［3］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部［M］.北京：化学出版社，2005：145.
［4］ 李海鹰，李静.车前子与其伪品炒葶苈子的鉴别［J］.基层医药杂志，2001，15(1):36-37.
