涎腺粘液表皮样癌中Ⅳ型胶原的表达及临床意义

【摘要】  目的：探讨Ⅳ型胶原蛋白在涎腺粘液表皮样癌中的表达及临床意义。方法：应用免疫组织化学Ｓ-Ｐ方法，对４６例涎腺粘液表皮样癌进行Ⅳ型胶原蛋白的检测。结果：涎腺粘液表皮样癌中Ⅳ型胶原与其分化程度及淋巴结转移有关（P<0.0５），而与患者的性别、年龄无关（P>0.0５）。结论：Ⅳ型胶原的异常表达与涎腺粘液表皮样癌的生物学行为密切相关，可作为评估涎腺粘液表皮样癌预后的有效指标。

【关键词】  涎腺；癌/粘液表皮样；免疫组织化学

    【ABSTRACT】  Objective:To investigate the clinical significance of Ⅳ collagen expressions in mucoepidermoid carcinoma of salivary gland.Methods:The expressions of Ⅳ collagen proteins were detected by immunohistochemistry S-P method in 46 cases with mucoepidermoid carcinoma of salivary gland.Results:Ⅳ collagen was significantly correlated with its differentiation (P<0.05) and lymph node metastasis.Ⅳ collagen did not correlate with age and sex (P>0.05).Conclusion:Ⅳcollagen proteins Expressions are correlated with the malignant progression of mucoepidermoid careinoma in salivary glang and have important effect on predicting the prognosis for the patients with mucoepidermoid carcinoma in salivary glang.

    【KEY WORDS】  Salivary Glands;Carcinoma/Mucoepidermoid;Immunohistochemistry

    近年来,随着分子生物学研究的进展,有关细胞外基质与肿瘤细胞之间的相互作用在癌细胞浸袭中的意义有了较深入的研究,其中肿瘤基质中Ⅳ型胶原在肿瘤细胞的异常改变已成为研究热点。Ⅳ型胶原由血管内皮细胞所合成,并且是血管基底膜的组成成分［1］　。为探讨涎腺粘液表皮样癌表现出不同转移能力的可能机理，对Ⅳ型胶原蛋白的表达进行了研究，旨在进一步阐明涎腺粘液表皮样癌的生物学特性及临床意义。

    1  材料和方法

    1.1  材料  收集1990～2002年首次来河北北方学院附属第一手术的涎腺粘液表皮样癌患者46例，其中男性25例，女性21例；发病年龄40～60岁；有淋巴结转移9例，无淋巴结转移37例。对手术切除标本46例进行取材，经10%中性甲醛溶液固定，梯度酒精脱水，石蜡包埋，切片厚度为4～5μm，HE染色确诊。

    1.2  试剂  采用武汉博士德生物工程公司提供的Ⅳ型胶原单克隆抗体，S-P试剂盒，DAB显色剂购自北京中山生物公司。

    1.3  方法  S-P免疫组织化学方法,染色过程严格按试剂盒规定程序进行，切片常规脱蜡至水，经0.3%过氧化氢10min，枸橼酸盐缓冲溶液加热抗原修复20min，正常羊血清封闭10min，吸去多余血清后滴加第一抗体（Ⅳ型胶原单克隆抗体,即Ⅳ collagen） 4℃孵育过夜。清洗后滴加第二抗体，37℃ 30min,再清洗,滴加第三抗体，37℃ 30min,DAB显色,用已知免疫组化阳性切片做阳性对照,PBS代替第一抗体做阴性对照。

    1.４  判断标准  Ⅳ型胶原阳性染色显示涎腺粘液表皮样癌巢周围基底膜的完整程度分为4级:完全缺如(-)、碎片型(+)、断续型（++）、连续型（+++）。

    1.5  统计学方法  统计分析方法为χ2检验，P<0.05为有统计学差异。

    2  结果

    Ⅳ型胶原表达与涎腺粘液表皮样癌病理指标之间的关系见表1。

    Ⅳ型胶原在涎腺粘液表皮样癌中表达的强弱与癌组织的分化程度及淋巴结转移有关（P<0.05）,而与患者的性别、年龄无关（P>0.05）。表1  Ⅳ型胶原表达与涎腺粘液表皮样癌病理指标之间的关系（略 ）注：与低分化组相比*P<0.05；与有转移组相比△P<0.05

    ３  讨论

    基底膜是阻止肿瘤细胞浸润扩散过程中的一道天然屏障。Ⅳ型胶原是基底膜的重要成分，Ⅳ型胶原以原纤维的形式存在，通过共价键交联组成多价三维网结构，其分布变化与各种恶性肿瘤转移潜能有关［２,３］。在正常状态下，基底膜呈稳定且致密连续，能阻止大分子通过，肿瘤可破坏其连续性，并浸润、转移［４］。

  

  目前，Ⅳ型胶原异常表达的机制还不清楚，在肿瘤组织中的异常表达取决于各种因素。Ｄahlman等［５］研究发现肿瘤细胞可通过直接的细胞与细胞间接触或者是通过细胞因子，如血小板演生因子（PDGF）和转化生化因子（TGF－β）刺激成纤维细胞Col Ⅳ mRNA的转录。Pfohler等［６］研究证实，在肿瘤中Col Ⅳ mRNA水平表达是升高的。在肿瘤浸袭和转移过程中，组织屏障作用的丧失是一个重要作用，但是近年来的研究发现，Col Ⅰ、Col Ⅳ自身的生物作用，尤其是对肿瘤细胞生物学行为的影响不可忽视。例如，ColⅠ和　Col Ⅳ可以提高肿瘤细胞的运动、迁移能力，有利于具有高运动性基因表型的肿瘤细胞生长，从而加强肿瘤细胞浸润和转移能力［７,８］。

    我们采用免疫组织化学方法检测１０例正常涎腺组织及４６例涎腺粘液表皮样癌组织中Ⅳ型胶原的表达。结果显示，正常涎腺组织Ⅳ型胶原是连续完整型,而癌组织中Ⅳ型胶原分布有不同程度减少，进一步研究表明，癌组织低分化，有淋巴结转移的涎腺粘液表皮样癌患者，Ⅳ型胶原表达以完全缺如及碎片状为主。而高分化，无淋巴结转移涎腺粘液表皮样癌患者，Ⅳ型胶原表达以连续型、断续型为主。即低分化，有淋巴结转移Ⅳ型胶原表达的阳性率明显低于高分化、无淋巴结转移组（P<0.05)。提示癌巢周围基底膜Ⅳ胶原的完整性越差，术后发生转移的可能性越大。涎腺粘液表皮样癌组织周围基底膜中Ⅳ型胶原起着阻止肿瘤细胞扩散的屏障作用，它的完整程度可提供病人预后的信息。这说明Ⅳ型胶原表达与涎腺粘液表皮样癌发生、及肿瘤的生物学行为密切相关［９］。以Ⅳ型胶原为主的涎腺粘液表皮样癌周围膜的破坏是癌淋巴结转移的重要因素。因此，检测癌周围膜中Ⅳ型胶原的分布状态对于诊断涎腺粘液表皮样癌的淋巴结转移，确定患者预后有重要临床意义。

【】
  １ Kosmehl H，Berndt A，Katenkamp D,et al.Molecular variants of fibronectin and laminin structure physiological occurrence and histopathological aspects［J］.Virchows Arch,1996,429(6):311-322

２ Galbavy S,Lukac L,Porubsky J,et al.Collagen type Ⅳ in epithelial tumours of colon［J］.Acta Histochem,2002,104:331-334

３ Yantiss RK,Bosenberg MW,Antonioli DA,et al.Utility of MMP-1,P53,E-cadherin and collagen Ⅳ immunohistochemical stains in the differential diagnosis of adenomas with misplaced epithelium versus adenomas with invasive adenocarcinoma［J］.Am J Surg Pathol,2002,26(2):206-215

４ Nakayama T,Ohtsuru A,Nakao K,et al.Expression in human hepatocellular carcinoma of nucleoside diphosphate kinase:a homologue of the nm23 gene product［J］.J Natl Cancer Inst,1992,84(17):1349-1352

５ Dahlman T,Lammerts E,Bergstrom D,et al.Collagen type Ⅰexpression in experimental anaplastic thyroid carcinoma regulation and relevance for tumorigenicity［J］.Int J Gancer,2002,98(2):186-192

６ Pfohler L,Fixemer T,Jung V,et al.In situ hybridization analysis of genes coding collagen Ⅳ alpha l chain,laminin beta l chain and S-laminin in prostate tissue and prostate cancer: increased basement membrane gene expression in high-grade and metastatic lesions［J］.Prostate,1998,36(3):143-150

７ Demou ZN,Mcintire LV.Fully automated three-dimensional tracking of cancer cells in collagen gels:determination of motility phenotypes at the cellular level［J］.Cancer Res,2002:62(18):5301-5307

８ Koike K,Kogawa K,Takayama T,et al.Enhanced expression of type Ⅳ collagen-binding protein (P29) in Fy-n-transfected murine fibrosarcoma cells［J］.Jpn J Cancer Res,2002,93(10)：1090-1099

９ 刘胜春,吴凯南,厉红元.Ⅳ型胶原、层黏连蛋白和纤维连接蛋白在乳腺非典型增生及癌变中的表达［J］.肿瘤防治研究,2004，11(31):674-676